Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף תחליב ננו-תחליב (RA) שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. על ידי הוספת RA שאושר על ידי ה- FDA לננו-תחליב, sIgA ספציפי לאנטיגן קודם בנרתיק ובמעי הדק לאחר הזרקה תוך שרירית של ננו-תחליב.

Abstract

ננו-מבנים קטיוניים התפתחו כמערכת אספקת אדג'ובנט ואנטיגן המשפרת את הבשלת התאים הדנדריטיים, יצירת ROS וספיגת אנטיגן ולאחר מכן מקדמת תגובות חיסוניות ספציפיות לאנטיגן. בשנים האחרונות, חומצה רטינואית (RA) זוכה לתשומת לב גוברת בשל השפעתה בהפעלת התגובה החיסונית הרירית; עם זאת, על מנת להשתמש RA כמו adjuvant רירית, יש צורך לפתור את הבעיה של פירוק שלה, העמסה, ומשלוח. במאמר זה אנו מתארים מערכת אספקה קטיונית של חומצה רטינואית בעטוף תחליב ננו-תחליב (CNE-RA) המורכבת מהשומנים הקטיוניים 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOTAP), חומצה רטינואית, סקוואלן כשלב השמן, פוליסורבט 80 כחומר פעילי שטח, וסורביטן טריאולאט 85 כקו-פעילי שטח. תכונותיו הפיזיקליות והכימיות אופיינו באמצעות פיזור אור דינמי וספקטרופוטומטר. חיסון עכברים בתערובת של אנטיגן (אובלבומין, OVA) ו- CNE-RA העלה באופן משמעותי את רמות האימונוגלובולין A (sIgA) המפריש אנטי-OVA בנוזל שטיפת הנרתיק ובנוזל שטיפת המעי הדק של עכברים בהשוואה ל- OVA בלבד. פרוטוקול זה מתאר שיטה מפורטת להכנה, אפיון והערכה של ההשפעה האדג'ובנטית של CNE-RA.

Introduction

אדג'ובנטים משמשים לעתים קרובות כדי לשפר את היעילות של חיסון על ידי גירוי המערכת החיסונית להגיב חזק יותר לחיסון, ובכך להגדיל את החסינות לפתוגן מסוים1. ננו-תחליב (NE) אדג'ובנט מתייחס למערכת פיזור קולואידית עם יציבות תרמודינמית על ידי תחליב חלק מסוים של פאזת שמן ופאזה מימית כדי לייצר תחליב בצורה של מים בשמן (W/O) או שמן במים (O/W)2. אדג'ובנט ננו-תחליב O/W יכול לייצר ציטוקינים וכימוקינים באתר ההזרקה, לגרום לצבירה מהירה ולשגשוג של תאים חיסוניים חשובים כגון מונוציטים, נויטרופילים ואאוזינופילים, לשפר את התגובה החיסונית, ולשפר את האימונוגניות של אנטיגנים3. נכון לעכשיו, שלושה אדג'ובנטים של ננו-תחליב (MF59,....

Protocol

הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם למדריך לשימוש וטיפול בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה לרווחת חיות מעבדה ואתיקה של האוניברסיטה הצבאית השלישית לרפואה.

1. הכנת ננו-תחליבים (NEs)

  1. להכנת פאזה מימית, יש להמיס 0.15 גרם פוליסורבט 80 ב-28.2 מ"ל של מלח חוצץ פוספט (PBS) תוך ערבוב ב-40.......

Representative Results

בסך הכל הוכנו ארבע פורמולציות ננו-תחליב שאופיינו על-ידי גודל החלקיקים שלהן (איור 1), פוטנציאל הזטה שלהן ויעילות האנקפסולציה שלהן כפי שמוצג בטבלה 2. גודל החלקיקים היה מרוכז סביב 160-190nm והתוספת של DOTAP הפכה את פוטנציאל Zeta של ננו-תחליב. IgG בסרום ספציפי ל-OVA ותת-הקבוצה שלו ב?.......

Discussion

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. בהשוואה לאדג'ובנטים NE מסורתיים, יש לו את שני היתרונות הבאים. ראשית, באופן כללי, פני השטח של O/W NEs יש מטען שלילי גבוה, מה שמקשה על טעינה ישירה של אנטיגנים. NEs קטיוניים י?.......

Acknowledgements

מחקר זה מומן על ידי תוכנית המפתח של קרן צ'ונגצ'ינג למדעי הטבע (No. cstc2020jcyj-zdxmX0027) ופרויקט הקרן הלאומית הסינית למדעי הטבע (מס '32270988).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1640 mediumGIBCO, USAC11875500BT
450 nm Stop Solution for TMB SubstrateAbcamab171529-1000 mL
Automated Cell CounterCountstar, ChinaIC1000
BSASigma-Aldrich, USAB2064-100G
Centrifuge 5810 REppendorf, Germany5811000398
Danamic Light ScatteringMalvernZetasizer Nano S90
DOTAPCordenPharma, SwitzerlandO02002
ELISpot Plus: Mouse IFN-gamma (ALP)mabtechab205719
Fetal Bovine SerumGIBCO, USA10099141C
Full-function Microplate ReaderThermo Fisher Scientific, USAVL0000D2
Goat Anti-Mouse IgG1(HRP)Abcamab97240-1mg
Goat Anti-Mouse IgA alpha chain (HRP)Abcamab97235-1mg
Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP)AbcamAb205720-500ug
Goat Anti-Mouse IgG2a heavy chain (HRP)Abcamab97245-1mg
High pressure homogenizerATS
MONTANE 85 PPISEPPIC, FranceL12910
MONTANOX 80 PPISEPPIC, France36372K
OVA257–264Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
OVA323-339Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
Phosphate buffer salineZSGB-bioZLI-9061
Red Blood Cell Lysis BufferSolarbio, ChinaR1010
retinoic acidTCI, JapanTCI-R0064-5G
SqualeneSigma, USAS3626
T10 basic Ultra-TurraxIKA, Germany
TMB ELISA SubstrateAbcamab171523-1000ml
trypsin inhibitorDiamondA003570-0100
Tween-20Macklin, China9005-64-5
Ultraviolet spectrophotometerHitachiU-3900

References

  1. Pulendran, B., Arunachalam, P. S., O'Hagan, D. T. Emerging concepts in the science of vaccine adjuvants. Nat Rev Drug Discov. 20 (6), 454-475 (2021).
  2. Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. Nanoemul....

Explore More Articles

JoVE204DOTAPOVA

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved