חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות ל-OVA

Summary

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף תחליב ננו-תחליב (RA) שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. על ידי הוספת RA שאושר על ידי ה- FDA לננו-תחליב, sIgA ספציפי לאנטיגן קודם בנרתיק ובמעי הדק לאחר הזרקה תוך שרירית של ננו-תחליב.

Abstract

ננו-מבנים קטיוניים התפתחו כמערכת אספקת אדג'ובנט ואנטיגן המשפרת את הבשלת התאים הדנדריטיים, יצירת ROS וספיגת אנטיגן ולאחר מכן מקדמת תגובות חיסוניות ספציפיות לאנטיגן. בשנים האחרונות, חומצה רטינואית (RA) זוכה לתשומת לב גוברת בשל השפעתה בהפעלת התגובה החיסונית הרירית; עם זאת, על מנת להשתמש RA כמו adjuvant רירית, יש צורך לפתור את הבעיה של פירוק שלה, העמסה, ומשלוח. במאמר זה אנו מתארים מערכת אספקה קטיונית של חומצה רטינואית בעטוף תחליב ננו-תחליב (CNE-RA) המורכבת מהשומנים הקטיוניים 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOTAP), חומצה רטינואית, סקוואלן כשלב השמן, פוליסורבט 80 כחומר פעילי שטח, וסורביטן טריאולאט 85 כקו-פעילי שטח. תכונותיו הפיזיקליות והכימיות אופיינו באמצעות פיזור אור דינמי וספקטרופוטומטר. חיסון עכברים בתערובת של אנטיגן (אובלבומין, OVA) ו- CNE-RA העלה באופן משמעותי את רמות האימונוגלובולין A (sIgA) המפריש אנטי-OVA בנוזל שטיפת הנרתיק ובנוזל שטיפת המעי הדק של עכברים בהשוואה ל- OVA בלבד. פרוטוקול זה מתאר שיטה מפורטת להכנה, אפיון והערכה של ההשפעה האדג'ובנטית של CNE-RA.

Introduction

אדג'ובנטים משמשים לעתים קרובות כדי לשפר את היעילות של חיסון על ידי גירוי המערכת החיסונית להגיב חזק יותר לחיסון, ובכך להגדיל את החסינות לפתוגן מסוים¹. ננו-תחליב (NE) אדג'ובנט מתייחס למערכת פיזור קולואידית עם יציבות תרמודינמית על ידי תחליב חלק מסוים של פאזת שמן ופאזה מימית כדי לייצר תחליב בצורה של מים בשמן (W/O) או שמן במים (O/W)². אדג'ובנט ננו-תחליב O/W יכול לייצר ציטוקינים וכימוקינים באתר ההזרקה, לגרום לצבירה מהירה ולשגשוג של תאים חיסוניים חשובים כגון מונוציטים, נויטרופילים ואאוזינופילים, לשפר את התגובה החיסונית, ולשפר את האימונוגניות של אנטיגנים³. נכון לעכשיו, שלושה אדג'ובנטים של ננו-תחליב (MF59,....

Protocol

הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם למדריך לשימוש וטיפול בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה לרווחת חיות מעבדה ואתיקה של האוניברסיטה הצבאית השלישית לרפואה.

1. הכנת ננו-תחליבים (NEs)

1. להכנת פאזה מימית, יש להמיס 0.15 גרם פוליסורבט 80 ב-28.2 מ"ל של מלח חוצץ פוספט (PBS) תוך ערבוב ב-40.......

Discussion

בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. בהשוואה לאדג'ובנטים NE מסורתיים, יש לו את שני היתרונות הבאים. ראשית, באופן כללי, פני השטח של O/W NEs יש מטען שלילי גבוה, מה שמקשה על טעינה ישירה של אנטיגנים. NEs קטיוניים י?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1640 medium	GIBCO, USA	C11875500BT
450 nm Stop Solution for TMB Substrate	Abcam	ab171529-1000 mL
Automated Cell Counter	Countstar, China	IC1000
BSA	Sigma-Aldrich, USA	B2064-100G
Centrifuge 5810 R	Eppendorf, Germany	5811000398
Danamic Light Scattering	Malvern	Zetasizer Nano S90
DOTAP	CordenPharma, Switzerland	O02002
ELISpot Plus: Mouse IFN-gamma (ALP)	mabtech	ab205719
Fetal Bovine Serum	GIBCO, USA	10099141C
Full-function Microplate Reader	Thermo Fisher Scientific, USA	VL0000D2
Goat Anti-Mouse IgG1(HRP)	Abcam	ab97240-1mg
Goat Anti-Mouse IgA alpha chain (HRP)	Abcam	ab97235-1mg
Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP)	Abcam	Ab205720-500ug
Goat Anti-Mouse IgG2a heavy chain (HRP)	Abcam	ab97245-1mg
High pressure homogenizer	ATS
MONTANE 85 PPI	SEPPIC, France	L12910
MONTANOX 80 PPI	SEPPIC, France	36372K
OVA257–264	Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.	NA
OVA323-339	Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.	NA
Phosphate buffer saline	ZSGB-bio	ZLI-9061
Red Blood Cell Lysis Buffer	Solarbio, China	R1010
retinoic acid	TCI, Japan	TCI-R0064-5G
Squalene	Sigma, USA	S3626
T10 basic Ultra-Turrax	IKA, Germany
TMB ELISA Substrate	Abcam	ab171523-1000ml
trypsin inhibitor	Diamond	A003570-0100
Tween-20	Macklin, China	9005-64-5
Ultraviolet spectrophotometer	Hitachi	U-3900