A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף תחליב ננו-תחליב (RA) שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. על ידי הוספת RA שאושר על ידי ה- FDA לננו-תחליב, sIgA ספציפי לאנטיגן קודם בנרתיק ובמעי הדק לאחר הזרקה תוך שרירית של ננו-תחליב.
ננו-מבנים קטיוניים התפתחו כמערכת אספקת אדג'ובנט ואנטיגן המשפרת את הבשלת התאים הדנדריטיים, יצירת ROS וספיגת אנטיגן ולאחר מכן מקדמת תגובות חיסוניות ספציפיות לאנטיגן. בשנים האחרונות, חומצה רטינואית (RA) זוכה לתשומת לב גוברת בשל השפעתה בהפעלת התגובה החיסונית הרירית; עם זאת, על מנת להשתמש RA כמו adjuvant רירית, יש צורך לפתור את הבעיה של פירוק שלה, העמסה, ומשלוח. במאמר זה אנו מתארים מערכת אספקה קטיונית של חומצה רטינואית בעטוף תחליב ננו-תחליב (CNE-RA) המורכבת מהשומנים הקטיוניים 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DOTAP), חומצה רטינואית, סקוואלן כשלב השמן, פוליסורבט 80 כחומר פעילי שטח, וסורביטן טריאולאט 85 כקו-פעילי שטח. תכונותיו הפיזיקליות והכימיות אופיינו באמצעות פיזור אור דינמי וספקטרופוטומטר. חיסון עכברים בתערובת של אנטיגן (אובלבומין, OVA) ו- CNE-RA העלה באופן משמעותי את רמות האימונוגלובולין A (sIgA) המפריש אנטי-OVA בנוזל שטיפת הנרתיק ובנוזל שטיפת המעי הדק של עכברים בהשוואה ל- OVA בלבד. פרוטוקול זה מתאר שיטה מפורטת להכנה, אפיון והערכה של ההשפעה האדג'ובנטית של CNE-RA.
אדג'ובנטים משמשים לעתים קרובות כדי לשפר את היעילות של חיסון על ידי גירוי המערכת החיסונית להגיב חזק יותר לחיסון, ובכך להגדיל את החסינות לפתוגן מסוים1. ננו-תחליב (NE) אדג'ובנט מתייחס למערכת פיזור קולואידית עם יציבות תרמודינמית על ידי תחליב חלק מסוים של פאזת שמן ופאזה מימית כדי לייצר תחליב בצורה של מים בשמן (W/O) או שמן במים (O/W)2. אדג'ובנט ננו-תחליב O/W יכול לייצר ציטוקינים וכימוקינים באתר ההזרקה, לגרום לצבירה מהירה ולשגשוג של תאים חיסוניים חשובים כגון מונוציטים, נויטרופילים ואאוזינופילים, לשפר את התגובה החיסונית, ולשפר את האימונוגניות של אנטיגנים3. נכון לעכשיו, שלושה אדג'ובנטים של ננו-תחליב (MF59,....
הניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם למדריך לשימוש וטיפול בחיות מעבדה ואושרו על ידי הוועדה לרווחת חיות מעבדה ואתיקה של האוניברסיטה הצבאית השלישית לרפואה.
1. הכנת ננו-תחליבים (NEs)
בסך הכל הוכנו ארבע פורמולציות ננו-תחליב שאופיינו על-ידי גודל החלקיקים שלהן (איור 1), פוטנציאל הזטה שלהן ויעילות האנקפסולציה שלהן כפי שמוצג בטבלה 2. גודל החלקיקים היה מרוכז סביב 160-190nm והתוספת של DOTAP הפכה את פוטנציאל Zeta של ננו-תחליב. IgG בסרום ספציפי ל-OVA ותת-הקבוצה שלו ב?.......
בפרוטוקול זה, פיתחנו חומצה רטינואית קטיונית בעטוף ננו-תחליב שתשמש כאדג'ובנט לקידום תגובות מערכתיות וריריות ספציפיות לאנטיגן. בהשוואה לאדג'ובנטים NE מסורתיים, יש לו את שני היתרונות הבאים. ראשית, באופן כללי, פני השטח של O/W NEs יש מטען שלילי גבוה, מה שמקשה על טעינה ישירה של אנטיגנים. NEs קטיוניים י?.......
מחקר זה מומן על ידי תוכנית המפתח של קרן צ'ונגצ'ינג למדעי הטבע (No. cstc2020jcyj-zdxmX0027) ופרויקט הקרן הלאומית הסינית למדעי הטבע (מס '32270988).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1640 medium | GIBCO, USA | C11875500BT | |
450 nm Stop Solution for TMB Substrate | Abcam | ab171529-1000 mL | |
Automated Cell Counter | Countstar, China | IC1000 | |
BSA | Sigma-Aldrich, USA | B2064-100G | |
Centrifuge 5810 R | Eppendorf, Germany | 5811000398 | |
Danamic Light Scattering | Malvern | Zetasizer Nano S90 | |
DOTAP | CordenPharma, Switzerland | O02002 | |
ELISpot Plus: Mouse IFN-gamma (ALP) | mabtech | ab205719 | |
Fetal Bovine Serum | GIBCO, USA | 10099141C | |
Full-function Microplate Reader | Thermo Fisher Scientific, USA | VL0000D2 | |
Goat Anti-Mouse IgG1(HRP) | Abcam | ab97240-1mg | |
Goat Anti-Mouse IgA alpha chain (HRP) | Abcam | ab97235-1mg | |
Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) | Abcam | Ab205720-500ug | |
Goat Anti-Mouse IgG2a heavy chain (HRP) | Abcam | ab97245-1mg | |
High pressure homogenizer | ATS | ||
MONTANE 85 PPI | SEPPIC, France | L12910 | |
MONTANOX 80 PPI | SEPPIC, France | 36372K | |
OVA257–264 | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | NA | |
OVA323-339 | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | NA | |
Phosphate buffer saline | ZSGB-bio | ZLI-9061 | |
Red Blood Cell Lysis Buffer | Solarbio, China | R1010 | |
retinoic acid | TCI, Japan | TCI-R0064-5G | |
Squalene | Sigma, USA | S3626 | |
T10 basic Ultra-Turrax | IKA, Germany | ||
TMB ELISA Substrate | Abcam | ab171523-1000ml | |
trypsin inhibitor | Diamond | A003570-0100 | |
Tween-20 | Macklin, China | 9005-64-5 | |
Ultraviolet spectrophotometer | Hitachi | U-3900 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved