Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

В этом протоколе мы разработали ретиноевую кислоту (РА), инкапсулированную катионной наноэмульсией, для использования в качестве адъюванта для стимулирования антиген-специфических системных и слизистых реакций. При добавлении одобренного FDA RA в наноэмульсию антиген-специфический sIgA стимулировался во влагалище и тонком кишечнике после внутримышечного введения наноэмульсии.

Abstract

Катионные наноструктуры появились как адъювант и система доставки антигенов, которая усиливает созревание дендритных клеток, генерацию АФК и поглощение антигена, а затем способствует антиген-специфическим иммунным реакциям. В последние годы все большее внимание уделяется ретиноевой кислоте (РА) из-за ее эффекта в активации иммунного ответа слизистой оболочки; однако для того, чтобы использовать РА в качестве вспомогательного средства слизистой, необходимо решить проблему его растворения, загрузки и доставки. Здесь мы описываем систему доставки катионной наноэмульсии, инкапсулированную ретиноевой кислотой (CNE-RA), состоящую из катионного липида 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (ДОТАП), ретиноевой кислоты, сквалена в качестве масляной фазы, полисорбата 80 в качестве поверхностно-активного вещества и сорбитана триолеата 85 в качестве сопутствующего поверхностно-активного вещества. Его физико-химические свойства были охарактеризованы с помощью динамического рассеяния света и спектрофотометра. Иммунизация мышей смесью антигена (овальбумина, OVA) и CNE-RA значительно повысила уровни анти-OVA секреторного иммуноглобулина А (sIgA) в жидкости для промывания влагалища и жидкости для промывания тонкой кишки мышей по сравнению с одной OVA. В этом протоколе подробно описан метод получения, характеристики и оценки адъювантного эффекта CNE-RA.

Introduction

Адъюванты часто используются для повышения эффективности вакцины, стимулируя иммунную систему более сильно реагировать на вакцину, тем самым повышая иммунитет к определенному патогену1. Адъювант наноэмульсии (NE) относится к коллоидной дисперсионной системе с термодинамической стабильностью путем эмульгирования определенной доли масляной фазы и водной фазы с получением эмульсии в форме воды в масле (W/O) или масла в воде (O/W)2. Н/В наноэмульсионный адъювант может продуцировать цитокины и хемокины в месте инъекции, индуцировать быструю агрегацию и пролиферацию важных иммунных клеток, таких как моноциты, нейтрофилы и эози....

Protocol

Эксперименты на животных проводились в соответствии с Руководством по использованию и уходу за лабораторными животными и одобрены Комитетом по благополучию и этике лабораторных животных Третьего военно-медицинского университета.

1. Приготовление наноэмульсий (НЭ)

Representative Results

В общей сложности было приготовлено четыре наноэмульсионных состава, которые характеризовались размером частиц (рис. 1), дзета-потенциалом и эффективностью инкапсуляции, как показано в таблице 2. Размер частиц был сосредоточен около 160-190 нм, и добавление DOTAP обр?.......

Discussion

В этом протоколе мы разработали катионную ретиноевую кислоту, инкапсулированную наноэмульсией, для использования в качестве адъюванта для стимулирования антиген-специфических системных и слизистых реакций. По сравнению с традиционными адъювантами NE он имеет следующие два преимущес.......

Acknowledgements

Это исследование было профинансировано ключевой программой Чунцинского фонда естественных наук (No cstc2020jcyj-zdxmX0027) и Китайским национальным фондом естественных наук (No 32270988).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
1640 mediumGIBCO, USAC11875500BT
450 nm Stop Solution for TMB SubstrateAbcamab171529-1000 mL
Automated Cell CounterCountstar, ChinaIC1000
BSASigma-Aldrich, USAB2064-100G
Centrifuge 5810 REppendorf, Germany5811000398
Danamic Light ScatteringMalvernZetasizer Nano S90
DOTAPCordenPharma, SwitzerlandO02002
ELISpot Plus: Mouse IFN-gamma (ALP)mabtechab205719
Fetal Bovine SerumGIBCO, USA10099141C
Full-function Microplate ReaderThermo Fisher Scientific, USAVL0000D2
Goat Anti-Mouse IgG1(HRP)Abcamab97240-1mg
Goat Anti-Mouse IgA alpha chain (HRP)Abcamab97235-1mg
Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP)AbcamAb205720-500ug
Goat Anti-Mouse IgG2a heavy chain (HRP)Abcamab97245-1mg
High pressure homogenizerATS
MONTANE 85 PPISEPPIC, FranceL12910
MONTANOX 80 PPISEPPIC, France36372K
OVA257–264Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
OVA323-339Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
Phosphate buffer salineZSGB-bioZLI-9061
Red Blood Cell Lysis BufferSolarbio, ChinaR1010
retinoic acidTCI, JapanTCI-R0064-5G
SqualeneSigma, USAS3626
T10 basic Ultra-TurraxIKA, Germany
TMB ELISA SubstrateAbcamab171523-1000ml
trypsin inhibitorDiamondA003570-0100
Tween-20Macklin, China9005-64-5
Ultraviolet spectrophotometerHitachiU-3900

References

  1. Pulendran, B., Arunachalam, P. S., O'Hagan, D. T. Emerging concepts in the science of vaccine adjuvants. Nat Rev Drug Discov. 20 (6), 454-475 (2021).
  2. Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. Nanoemul....

Explore More Articles

JoVE204OVA

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved