A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
В этом протоколе мы разработали ретиноевую кислоту (РА), инкапсулированную катионной наноэмульсией, для использования в качестве адъюванта для стимулирования антиген-специфических системных и слизистых реакций. При добавлении одобренного FDA RA в наноэмульсию антиген-специфический sIgA стимулировался во влагалище и тонком кишечнике после внутримышечного введения наноэмульсии.
Катионные наноструктуры появились как адъювант и система доставки антигенов, которая усиливает созревание дендритных клеток, генерацию АФК и поглощение антигена, а затем способствует антиген-специфическим иммунным реакциям. В последние годы все большее внимание уделяется ретиноевой кислоте (РА) из-за ее эффекта в активации иммунного ответа слизистой оболочки; однако для того, чтобы использовать РА в качестве вспомогательного средства слизистой, необходимо решить проблему его растворения, загрузки и доставки. Здесь мы описываем систему доставки катионной наноэмульсии, инкапсулированную ретиноевой кислотой (CNE-RA), состоящую из катионного липида 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолина (ДОТАП), ретиноевой кислоты, сквалена в качестве масляной фазы, полисорбата 80 в качестве поверхностно-активного вещества и сорбитана триолеата 85 в качестве сопутствующего поверхностно-активного вещества. Его физико-химические свойства были охарактеризованы с помощью динамического рассеяния света и спектрофотометра. Иммунизация мышей смесью антигена (овальбумина, OVA) и CNE-RA значительно повысила уровни анти-OVA секреторного иммуноглобулина А (sIgA) в жидкости для промывания влагалища и жидкости для промывания тонкой кишки мышей по сравнению с одной OVA. В этом протоколе подробно описан метод получения, характеристики и оценки адъювантного эффекта CNE-RA.
Адъюванты часто используются для повышения эффективности вакцины, стимулируя иммунную систему более сильно реагировать на вакцину, тем самым повышая иммунитет к определенному патогену1. Адъювант наноэмульсии (NE) относится к коллоидной дисперсионной системе с термодинамической стабильностью путем эмульгирования определенной доли масляной фазы и водной фазы с получением эмульсии в форме воды в масле (W/O) или масла в воде (O/W)2. Н/В наноэмульсионный адъювант может продуцировать цитокины и хемокины в месте инъекции, индуцировать быструю агрегацию и пролиферацию важных иммунных клеток, таких как моноциты, нейтрофилы и эози....
Эксперименты на животных проводились в соответствии с Руководством по использованию и уходу за лабораторными животными и одобрены Комитетом по благополучию и этике лабораторных животных Третьего военно-медицинского университета.
1. Приготовление наноэмульсий (НЭ)
В общей сложности было приготовлено четыре наноэмульсионных состава, которые характеризовались размером частиц (рис. 1), дзета-потенциалом и эффективностью инкапсуляции, как показано в таблице 2. Размер частиц был сосредоточен около 160-190 нм, и добавление DOTAP обр?.......
В этом протоколе мы разработали катионную ретиноевую кислоту, инкапсулированную наноэмульсией, для использования в качестве адъюванта для стимулирования антиген-специфических системных и слизистых реакций. По сравнению с традиционными адъювантами NE он имеет следующие два преимущес.......
Это исследование было профинансировано ключевой программой Чунцинского фонда естественных наук (No cstc2020jcyj-zdxmX0027) и Китайским национальным фондом естественных наук (No 32270988).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1640 medium | GIBCO, USA | C11875500BT | |
450 nm Stop Solution for TMB Substrate | Abcam | ab171529-1000 mL | |
Automated Cell Counter | Countstar, China | IC1000 | |
BSA | Sigma-Aldrich, USA | B2064-100G | |
Centrifuge 5810 R | Eppendorf, Germany | 5811000398 | |
Danamic Light Scattering | Malvern | Zetasizer Nano S90 | |
DOTAP | CordenPharma, Switzerland | O02002 | |
ELISpot Plus: Mouse IFN-gamma (ALP) | mabtech | ab205719 | |
Fetal Bovine Serum | GIBCO, USA | 10099141C | |
Full-function Microplate Reader | Thermo Fisher Scientific, USA | VL0000D2 | |
Goat Anti-Mouse IgG1(HRP) | Abcam | ab97240-1mg | |
Goat Anti-Mouse IgA alpha chain (HRP) | Abcam | ab97235-1mg | |
Goat Anti-Mouse IgG H&L (HRP) | Abcam | Ab205720-500ug | |
Goat Anti-Mouse IgG2a heavy chain (HRP) | Abcam | ab97245-1mg | |
High pressure homogenizer | ATS | ||
MONTANE 85 PPI | SEPPIC, France | L12910 | |
MONTANOX 80 PPI | SEPPIC, France | 36372K | |
OVA257–264 | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | NA | |
OVA323-339 | Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd. | NA | |
Phosphate buffer saline | ZSGB-bio | ZLI-9061 | |
Red Blood Cell Lysis Buffer | Solarbio, China | R1010 | |
retinoic acid | TCI, Japan | TCI-R0064-5G | |
Squalene | Sigma, USA | S3626 | |
T10 basic Ultra-Turrax | IKA, Germany | ||
TMB ELISA Substrate | Abcam | ab171523-1000ml | |
trypsin inhibitor | Diamond | A003570-0100 | |
Tween-20 | Macklin, China | 9005-64-5 | |
Ultraviolet spectrophotometer | Hitachi | U-3900 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved