Мониторинг циркадных колебаний с помощью биолюминесцентного репортера в органоидах

Большинство живых организмов обладают циркадными ритмами, которые представляют собой биологические процессы, происходящие в течение примерно 24 часов и регулирующие разнообразный репертуар клеточных и физиологических процессов, начиная от циклов сна и бодрствования и заканчивая метаболизмом. Этот часовой механизм приводит в действие организм на основе изменений окружающей среды и координирует временную регуляцию молекулярных и физиологических событий. Ранее было продемонстрировано, что автономные циркадные ритмы поддерживаются даже на уровне отдельных клеток с использованием клеточных линий, таких как фибробласты NIH3T3, которые сыграли важную роль в раскрытии механизмов циркадных ритмов. Однако эти клеточные линии представляют собой гомогенные культуры, лишенные многоклеточности и устойчивых межклеточных коммуникаций. В последнее десятилетие была проведена обширная работа по разработке, характеристике и применению 3D-органоидов, которые представляют собой многоклеточные системы in vitro , напоминающие морфологические структуры и функции in vivo . В данной работе описан протокол детектирования циркадных ритмов с использованием биолюминесцентного репортера в кишечных энтероидах человека, что позволяет исследовать циркадные ритмы в многоклеточных системах in vitro.