A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
אנו מתארים בדיקה פלואורסצנטית שיכולה לאשר במהירות ובזול את היכולת של תרכובות חדשות לכלאט ברזל. הבדיקה מודדת את יכולתן של תרכובות להתחרות בפעילות קשירת הברזל של הגשושית הפלואורסצנטית החלשה Calcein, וכתוצאה מכך עלייה ניתנת לכימות בפלואורסצנטיות כאשר מתרחשת כלציה.
תאים סרטניים דורשים כמויות גדולות של ברזל כדי לשמור על התפשטותם. מטבוליזם של ברזל נחשב לסימן היכר של סרטן, מה שהופך את הברזל למטרה תקפה לגישות אנטי-סרטניות. פיתוח תרכובות חדשניות וזיהוי לידים לשינוי נוסף מחייב ביצוע בדיקות הוכחת מנגנון. ישנם מבחנים רבים להערכת ההשפעה על ההתפשטות; עם זאת, היכולת לכלאט ברזל היא מדד חשוב שלעתים מתעלמים ממנו בשל העלויות הגבוהות של הציוד והאתגר לכמת במהירות ובאופן משכפל את חוזק הקלציה. במאמר זה אנו מתארים שיטה פלואורסצנטית נטולת תאים הניתנת לכימות וזולה כדי לאשר את יכולתן של תרכובות חדשות לכלאט ברזל. הבדיקה שלנו מסתמכת על הצבע הפלואורסצנטי הזול הזמין מסחרית Calcein, אשר ניתן לכמת את הפלואורסצנטיות שלו על רוב קוראי לוחות מיקרוטיטר פלואורסצנטיים. קלצין הוא כלטור ברזל חלש, והפלואורסצנטיות שלו מרוה כאשר הוא קושר את Fe2+/3+; פלואורסצנטיות משוחזרת כאשר כלטור חדש מתחרה בקלצין על Fe2+/3+ כבול. הסרת מרווה פלואורסצנטית וכתוצאה מכך עלייה פלואורסצנטית מאפשרת לקבוע את יכולת הקלציה של כלטור משוער חדש. לכן, אנו מציעים בדיקה זולה ובעלת תפוקה גבוהה המאפשרת סינון מהיר של תרכובות כלטור מועמדות חדשניות.
שינויים פנוטיפיים בתאים הקשורים להתפתחות סרטן באמצעות קבוצה משותפת של יכולות ביולוגיות משתנות מכונים כיום בדרך כלל סימני ההיכר של סרטן. ביניהם שינויים הנובעים מתכנות מחדש של מטבוליזם של אנרגיה, הנפוצים בביולוגיה של התא הסרטני1. תכנות מחדש מטבולי כזה כולל דרישה מוגברת לברזל לתמיכה בהתרבות מהירה ובצמיחת הגידול2. צמא זה לברזל מוביל למטבוליזם ברזל לא מווסת, אשר כשלעצמו נחשב סימן ההיכר של סרטן 3,4, עם חוסר ויסות המתרחש בכל השלבים5. סימני ההיכר של גרורות, שהוצעו לאחרונה על ידי וולש והרסט, כוללים תפקיד לברזל
1. הכנת פתרון מלאי
עבור השיטה שמוצגת בשלב 2, הניסוי הראשון הזה (איור 1) קבע את הטווח הליניארי של קורא הלוחות הפלואורסצנטיים של מיקרוטיטר בעת זיהוי פליטות פלואורסצנטיות של קלצאין. התוצאות המייצגות שלנו מראות טווח ליניארי רחב של פלואורסצנטיות Calcein בין 0-100 μM. ANOVA עם ניתוח LSD לאח?.......
הסתמכות היתר של סוגי סרטן על ברזל כדי לתדלק את חילוף החומרים שלהם הופכת את כלציית הברזל לתוספת פוטנציאלית למשטרים טיפוליים4. עם זאת, קיימת יכולת מוגבלת לסנן במהירות כלטורים חדשים של יוני מתכת בשל יכולתם לקשור יוני ברזל. הגשושית הפלואורסצנטית הנפוצה והנפוצה .......
ברצוננו להודות לאוניברסיטת נורת'מבריה על תמיכתם.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Ammonium iron(II) sulfate hexahydrate | Sigma-Aldrich | 215406 | other wise known as FAS |
Calcein | Sigma-Aldrich | C0875 | |
Deferiprone | Sigma-Aldrich | 379409 | |
Dulbecco′s Phosphate Buffered Saline | Sigma-Aldrich | D5652 | magnesium and calcium free |
Greiner CELLSTAR 96 well plates | Sigma-Aldrich | M0812 | any optically transparent 96 well plate will work |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved