Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Этот протокол описывает модифицированную процедуру быстрого выделения чистых ооцитов стадии I у рыбок данио, лишенных гранулезных клеток, тем самым обеспечивая удобный метод для исследования, специфичного для ооцитов.

Abstract

Изучение развития ооцитов имеет важное значение для биологии развития. Данио рерио (Danio rerio) широко использовалась в качестве модельного организма для исследования ранних процессов развития от ооцита до эмбриона. У рыбок данио ооциты окружены одним слоем соматических гранулезных клеток. Тем не менее, отделение гранулезных клеток от ооцитов представляет собой сложную задачу, поскольку получение чистых ооцитов имеет решающее значение для точного анализа. Несмотря на то, что были предложены различные методы выделения ооцитов данио-рерио на разных стадиях развития, современные методы не позволяют полностью удалить гранулезные клетки, что ограничивает точность анализа генома, сосредоточенного исключительно на ооцитах. В этом исследовании мы успешно разработали быстрый и эффективный процесс выделения чистых ооцитов I стадии у рыбок данио-рерио с одновременным устранением загрязнения гранулезных клеток. Этот метод облегчает биохимический и молекулярный анализ, особенно при изучении эпигенетических аспектов и структуры генома, специфичных для ооцитов. Примечательно, что метод удобен в использовании, сводит к минимуму повреждение ооцитов и обеспечивает практическое решение для последующих исследований и анализов.

Introduction

Рыбки данио рерио являются одной из наиболее важных модельных систем в биологии развития. В последние годы в многочисленных исследованиях рыбки данио использовались в качестве модели для изучения важных биологических событий и регуляторных процессов от ооцита до эмбриона. Они охватывают сложные процессы развития исозревания ооцитов1, функциональность материнскихгенов2, регуляцию материнско-зиготическихпереходов3, а также обширный омиксныйанализ4.

Гранулезные клетки, соматические клетки, обволакивающие и питающие ....

Protocol

Все рыбки данио содержались в соответствии со строгими рекомендациями по уходу за животными, изложенными соответствующими национальными и/или местными органами защиты животных. Содержание и обращение с рыбой получило одобрение как местных властей, так и комитета по.......

Representative Results

На рисунке 1 показана морфология яичников, наблюдаемая как у взрослых, так и у молодых рыбок данио, демонстрируя ооциты на разных стадиях развития, которые служат в качестве ориентира. На рисунке 1А представлено графическое представлен?.......

Discussion

В этом исследовании мы разработали метод выделения чистых и чистых ооцитов I стадии, за исключением гранулезных клеток, для последующего анализа (в частности, геномного анализа). Сравнивая этот модифицированный метод с упомянутым методом13, можно отметить.......

Acknowledgements

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (32170813 и 31871449) и Департаментом науки и технологий провинции Сычуань (2024NSFSC0651), а также проектом 1·3·5 для дисциплин передового опыта – Фондом клинических исследований, Западно-Китайская больница, Сычуаньский университет (2024HXFH035). Авторы хотели бы поблагодарить Чжао Вана и Яньцю Гао из лаборатории детской хирургии за разведение рыбок данио, связанных с этой работой. Авторы также хотели бы поблагодарить всех рецензентов, принимавших участие в рецензировании, а также MJEditor (www.mjeditor.com) за предоставление услуг по редактированию на английском ....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Kinger's cell dissociation solutionPlantChemMedPC-33689Kinger's cell dissociation solution can be stored stably at -20 °C after packaging and can be used after thawing at low temperature (4 °C). It can be used directly for dissociating zebrafish ovaries. The optimal temperature is 28.5 °C, for approximately 2-3 hours. The duration can be adjusted according to the specific dissociation conditions, either shortened or extended (https://www.plantchemmed.com/chanpin?productNo=PC-33689).
Cell strainers (100 μm )Falcon352360
Fluorescence microscopeZeissAxio Zoom.V16
ForcepsDumont#5
Glass capillary needle//Blunted by burning with lighter
HoechstYesen40732ES03
Low adsorption pipette tips (10 μl )LabsellectT-0010-LR-R-S
Leibovitz’s L-15 medium medium (with L-glutamine)HycloneSH30525.01
Ice bucket//Ice-cold water is used to euthanize zebrafish
IncubatorWIGGENSWH-01
Juvenile fish//5–6 weeks post-fertilization, standard length [SL] of 10–15 mm
Plastic dish (35 mm )SORFA230101
StereomicroscopeMoticSMZ-161
Tissue Culture Plate (6-wells)SORFA0110006
Vannas spring scissorsFine Science Toosl#15000-00

References

Explore More Articles

I

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved