الكشف عن وعزل العطيفة spp. من اللحوم النيئة

تقدم هذه المقالة بروتوكولا سريعا وقويا لعزل العطيفة spp. من اللحوم النيئة ، مع التركيز بشكل خاص على العطيفة الصائمية والعطيفة القولونية. يعتمد البروتوكول على الأساليب المعمول بها ، مما يضمن التوافق مع التقنيات السائدة التي تستخدمها الهيئات التنظيمية مثل إدارة الغذاء والدواء (FDA) ووزارة الزراعة الأمريكية (USDA) في الولايات المتحدة الأمريكية ، وكذلك المنظمة الدولية للتوحيد القياسي (ISO) في أوروبا. من الأمور المركزية في هذا البروتوكول جمع الشطف ، الذي يتركز ويعاد تعليقه في وسائط مرق بولتون التي تحتوي على دم الحصان. وقد ثبت أن هذه الوسيلة تسهل استعادة خلايا العطيفة المجهدة وتقلل من مدة التخصيب المطلوبة بنسبة 50٪. ثم يتم نقل العينات المخصبة إلى أغشية النيتروسليلوز على ألواح البروسيلا. لتحسين حساسية وخصوصية الطريقة ، تم تقييم أغشية مرشح بحجم المسام 0.45 ميكرومتر و 0.65 ميكرومتر. كشفت البيانات عن زيادة بمقدار 29 ضعفا في استعادة الخلايا باستخدام مرشح حجم المسام 0.65 ميكرومتر مقارنة بحجم المسام 0.45 ميكرومتر دون التأثير على الخصوصية. تسمح الخصائص عالية الحركة للكامبيلوباكتر للخلايا بالتحرك بنشاط عبر مرشحات الغشاء نحو وسط الآجار ، مما يتيح عزلا فعالا لمستعمرات العطيفة النقية. ويشتمل البروتوكول على مقايسة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي المتعدد في الوقت الحقيقي (mqPCR) لتحديد العزلات على مستوى الأنواع. توفر هذه التقنية الجزيئية وسيلة موثوقة وفعالة لتحديد الأنواع. أظهرت التحقيقات التي أجريت على مدى السنوات الاثني عشر الماضية والتي شملت بيع اللحوم بالتجزئة قدرة هذه الطريقة على تعزيز استعادة العطيفة من عينات اللحوم الملوثة طبيعيا مقارنة بالطرق المرجعية الحالية. علاوة على ذلك ، يتميز هذا البروتوكول بوقت إعداد ومعالجة أقل. نتيجة لذلك ، فإنه يقدم بديلا واعدا للاسترداد الفعال للكامبيلوباكتر من اللحوم. علاوة على ذلك ، يمكن دمج هذا الإجراء بسلاسة مع الأساليب القائمة على الحمض النووي ، مما يسهل الفحص السريع للعينات الإيجابية جنبا إلى جنب مع تحليل تسلسل الجينوم الكامل الشامل.