Karakterisering av multidrug efflux systemer i Acinetobacter baumannii ved bruk av en effluks-mangelfull bakteriestamme og en single-copy genet ekspresjonssystem

Acinetobacter baumannii er anerkjent som et utfordrende gramnegativt patogen på grunn av sin utbredte resistens mot antibiotika. Det er avgjørende å forstå mekanismene bak denne motstanden for å designe nye og effektive terapeutiske alternativer. Dessverre hindres vår evne til å undersøke disse mekanismene i A. baumannii av mangelen på egnede genetiske manipulasjonsverktøy. Her beskriver vi metoder for å utnytte et kromosomalt mini-Tn7-basert system for å oppnå enkeltkopi-genuttrykk i en A. baumannii-stamme som mangler funksjonelle RND-type effluksmekanismer. Enkeltkopiinnsetting og induserbart efflukspumpeuttrykk er ganske fordelaktig, da tilstedeværelsen av RND-effluksoperoner på høykopinummerplasmider ofte tolereres dårlig av bakterieceller. Videre bidrar inkorporering av rekombinante mini-Tn7-ekspresjonsvektorer i kromosomet til en surrogat A. baumannii-vert med økt effluksfølsomhet til å omgå interferens fra andre efflukspumper. Dette systemet er verdifullt ikke bare for å undersøke ukarakteriserte bakterielle efflukspumper, men også for å vurdere effektiviteten av potensielle hemmere rettet mot disse pumpene.