טכניקות לדגימה מהירה של שישה איברים חיוניים בקסנופוס בוגר

Summary

מאמר זה מציג מדריך לדגימת שישה איברים משמעותיים ומגוונים בקסנופוס בוגר שניתן לגשת אליהם במהירות ובקלות: חדר הלב, אונת הכבד, הלבלב, גופי השומן, הכליות הזוגיות והעור.

Abstract

Xenopus היה אורגניזם מודל רב עוצמה להבנת התפתחות חולייתנים ומחלות במשך יותר ממאה שנים. בעוד שטכניקות ניתוח ודיסקציה ניסיוניות של העובר תועדו היטב, תיאורים של מבנים ואיברים בוגרים של קסנופוס , יחד עם טכניקות לעבודה עם מבוגרים, לא עודכנו כדי לקחת בחשבון את הדרישות של גישות מודרניות כגון פרוטאומיקה כמותית ושעתוק חד-תאי. הפרספקטיבות של סוג התא ושל הגנים דורשות תצפיות מנוגדות בשלבים עובריים לאלה שברקמות בוגרות. איברי הזחל עוברים שינויים משמעותיים במבנה הכללי, במורפולוגיה שלהם ובמיקום האנטומי שלהם לאורך כל המעבר של הזחל לבוגר, בעיקר במהלך עיצוב מחדש של מטמורפוזה מסיבית. קביעת סטנדרטים חזקים לזיהוי ונתיחת איברים היא חיונית כדי להבטיח שמערכי נתונים הנובעים ממחקרים שבוצעו במעבדות שונות יוכלו להיות עקביים. הפרוטוקול הנוכחי מזהה שישה מהאיברים בקסנופוס הבוגר, ומדגים שיטות לדיסקציה ודגימה של חדר הלב, הכבד, גוף השומן, הלבלב, הכליה הזוגית והעור של הקסנופוס הבוגר. בהתאם לשיטות השימור, האיברים המנותחים יכולים לשמש לפרוטאומיקה כמותית, שעתוק תא בודד/גרעינים, הכלאה באתר , אימונוהיסטוכימיה, היסטולוגיה ועוד. פרוטוקול זה נועד לתקנן את דגימת הרקמות ולהקל על חקירות רב-מעבדתיות של מערכות האיברים הבוגרים.

Introduction

למרות ש"הדיסקציה הדיגיטלית" של קסנופוס בוגר זמינה¹, דגימת איברים ורקמות הניתנים לשכפול של קסנופוס בוגר נותרה מאתגרת ללא ההוראה המפורטת הזמינה עבור מודלים בוגרים אחרים (למשל עכברים ^2,3,4). מאמר זה נועד לספק הנחיות ברורות לדגימת איברים מדויקת וניתנת לשכפול של קסנופוס בוגר בדומה למה שזמין כיום עבור הזחלים שלהם⁵. דגש מושם על קלות ההשלמה כדי לשמור על טריות מקסימלית ולהנגיש את הפרוטוקול לכל המשתמשים.

למרות שיש מדריך דיסקציה יסודי עבור Rana ^sp.6, כמ....

Protocol

כל הניסויים בוצעו בהתאם לכללים ולתקנות של בית הספר לרפואה של הרווארד IACUC (הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים) (IS 00001365_3). התוצאות המייצגות מוצגות הן עבור זכר לבקנים בוגר והן עבור זכר לבקנים בוגר שאינו מחורר.

1. הכנה ניסיונית

הערה: אם מתבצע פרוט?.......

Discussion

מכיוון שפרוטוקול זה נועד למקסם את הטריות, דגימות מסוימות עשויות לכלול רקמות לא רצויות. לדוגמה, צינור hepatopancreatic וכמה mesentery נדגמים עם הלבלב, וכמה רקמת הצפק, בלוטות יותרת הכליה, שופכנים תמיד יידגמו עם הכליות זוג.  אם טריות אינה מהווה דאגה, ניתן להשיג דגימה מדויקת יותר באמצעות טכניקות מותאמות.

.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
5x Magnifying Glass with LED Light and Stand	amazon.com	B08QJ6J8P1	light must not produce heat
Disposable Transfer Pipets	VWR	414004-036
Dissecting Fine-Pointed Forceps	Fisher Scinetific	08-875
Dissecting scissors sharp piont, straight 6.5"	VWR	76457-374
Dissection Tray	Fisher Scinetific	14-370-284	styrofoam sheets are an acceptable alternative
Euthanasia container	US Plastic	Item 2860	alternative opaque containers acceptable
Euthanasia container lid	US Plastic	Item 3047
Iridectomy Scissors 6"	vwr	470018-938	iris scissors are an acceptable alternative
MS-222: Syncaine (formerly tricaine)	Pentair AES	TRS1
PBS 1x	Corning	21-040-CV
Sodium Bicarbonate, Powder, USP	Fisher Scientific	18-606-333
Specimen Forceps, Serrated	VWR	82027-442
T-Pins for Dissecting	Fisher Scinetific	S99385