Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

В этой статье представлено руководство по выборке шести важных и разнообразных органов у взрослого Xenopus , к которым можно быстро и легко получить доступ: желудочек сердца, доля печени, поджелудочная железа, жировые тела, парные почки и кожа.

Abstract

Xenopus уже более ста лет является мощным модельным организмом для понимания развития и болезней позвоночных. В то время как методы экспериментального анализа и препарирования эмбриона хорошо задокументированы, описания структур и органов Xenopus взрослого человека, а также методы работы со взрослыми особями не были обновлены с учетом требований таких современных подходов, как количественная протеомика и транскриптомика одиночных клеток. Клеточный тип и геноцентрические перспективы требуют сопоставления наблюдений на эмбриональных стадиях с наблюдениями во взрослых тканях. Органы личинки претерпевают значительные изменения в своей общей структуре, морфологии и анатомическом расположении на всем протяжении перехода от личинки к взрослой особи, особенно во время массивного ремоделирования метаморфоза. Установление надежных стандартов для идентификации и препарирования органов имеет решающее значение для обеспечения согласованности наборов данных, полученных в результате исследований, проведенных в различных лабораториях. В настоящем протоколе определены шесть органов у взрослого Xenopus, демонстрируются методы вскрытия и взятия проб из желудочка сердца, печени, жирового тела, поджелудочной железы, парной почки и кожи взрослого Xenopus. В зависимости от методов консервации, препарированные органы могут быть использованы для количественной протеомики, транскриптомики одиночных клеток/ядер, гибридизации in situ , иммуногистохимии, гистологии и т.д. Этот протокол направлен на стандартизацию отбора образцов тканей и облегчение многолабораторных исследований систем органов взрослого человека.

Introduction

Несмотря на то, что «цифровое вскрытие» взрослого Xenopus доступно1, воспроизводимый образец органов и тканей взрослого Xenopus остается сложной задачей без подробной инструкции, доступной для других взрослых моделей (например, мышей 2,3,4). Цель этой статьи — предоставить четкое руководство по точному и воспроизводимому отбору проб органов взрослых особей Xenopus, аналогичному тому, который в настоящее время доступен для их личинок5. Акцент сделан на простоте заполнения, чтобы сохранить максимальную а....

Protocol

Все эксперименты проводились в соответствии с правилами и нормами Гарвардской медицинской школы IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) (IS 00001365_3). Репрезентативные результаты показаны как для перфузированного, так и для неперфузионного самца взрослого альбиноса Xenopus laevis.

1........

Representative Results

Используя рисунки с 1 по 20 и следуя всем шагам этого протокола, желудочек сердца, левая доля печени, поджелудочная железа, левые жировые тела, парные почки и лоскут кожи были аккуратно иссечены в течение часа после эвтаназии. В течение этого времени образц.......

Discussion

Поскольку этот протокол направлен на максимальную свежесть, некоторые образцы могут содержать нежелательные ткани. Например, гепатопанкреатический проток и некоторые брыжейки берутся вместе с поджелудочной железой, а некоторая перитонеальная ткань, надпочечники и мочеточники всегд.......

Acknowledgements

Эта работа была поддержана грантом OD R24OD031956 NIH. Мы благодарим Саманту Джалберт, Джилл Ралстон и Кору Андерсон за их помощь и поддержку, а также нашего редактора и анонимных рецензентов за их полезные отзывы

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
5x Magnifying Glass with LED Light and Standamazon.comB08QJ6J8P1light must not produce heat
Disposable Transfer PipetsVWR414004-036
Dissecting Fine-Pointed ForcepsFisher Scinetific08-875
Dissecting scissors sharp piont, straight 6.5"VWR76457-374
Dissection TrayFisher Scinetific14-370-284styrofoam sheets are an acceptable alternative
Euthanasia containerUS Plastic Item 2860alternative opaque containers acceptable
Euthanasia container lidUS Plastic Item 3047
Iridectomy Scissors 6"vwr470018-938iris scissors are an acceptable alternative
MS-222: Syncaine (formerly tricaine)Pentair AESTRS1
PBS 1xCorning21-040-CV
Sodium Bicarbonate, Powder, USPFisher Scientific18-606-333
Specimen Forceps, SerratedVWR82027-442
T-Pins for DissectingFisher ScinetificS99385

References

  1. Porro, L. B., Richards, C. T. Digital dissection of the model organism Xenopus laevis using contrast-enhanced computed tomography. J Anat. 231 (2), 169-191 (2017).
  2. Ruehl-Fehlert, C., et al.

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved