A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
В этой статье представлено руководство по выборке шести важных и разнообразных органов у взрослого Xenopus , к которым можно быстро и легко получить доступ: желудочек сердца, доля печени, поджелудочная железа, жировые тела, парные почки и кожа.
Xenopus уже более ста лет является мощным модельным организмом для понимания развития и болезней позвоночных. В то время как методы экспериментального анализа и препарирования эмбриона хорошо задокументированы, описания структур и органов Xenopus взрослого человека, а также методы работы со взрослыми особями не были обновлены с учетом требований таких современных подходов, как количественная протеомика и транскриптомика одиночных клеток. Клеточный тип и геноцентрические перспективы требуют сопоставления наблюдений на эмбриональных стадиях с наблюдениями во взрослых тканях. Органы личинки претерпевают значительные изменения в своей общей структуре, морфологии и анатомическом расположении на всем протяжении перехода от личинки к взрослой особи, особенно во время массивного ремоделирования метаморфоза. Установление надежных стандартов для идентификации и препарирования органов имеет решающее значение для обеспечения согласованности наборов данных, полученных в результате исследований, проведенных в различных лабораториях. В настоящем протоколе определены шесть органов у взрослого Xenopus, демонстрируются методы вскрытия и взятия проб из желудочка сердца, печени, жирового тела, поджелудочной железы, парной почки и кожи взрослого Xenopus. В зависимости от методов консервации, препарированные органы могут быть использованы для количественной протеомики, транскриптомики одиночных клеток/ядер, гибридизации in situ , иммуногистохимии, гистологии и т.д. Этот протокол направлен на стандартизацию отбора образцов тканей и облегчение многолабораторных исследований систем органов взрослого человека.
Несмотря на то, что «цифровое вскрытие» взрослого Xenopus доступно1, воспроизводимый образец органов и тканей взрослого Xenopus остается сложной задачей без подробной инструкции, доступной для других взрослых моделей (например, мышей 2,3,4). Цель этой статьи — предоставить четкое руководство по точному и воспроизводимому отбору проб органов взрослых особей Xenopus, аналогичному тому, который в настоящее время доступен для их личинок5. Акцент сделан на простоте заполнения, чтобы сохранить максимальную а....
Все эксперименты проводились в соответствии с правилами и нормами Гарвардской медицинской школы IACUC (Institutional Animal Care and Use Committee) (IS 00001365_3). Репрезентативные результаты показаны как для перфузированного, так и для неперфузионного самца взрослого альбиноса Xenopus laevis.
1........
Используя рисунки с 1 по 20 и следуя всем шагам этого протокола, желудочек сердца, левая доля печени, поджелудочная железа, левые жировые тела, парные почки и лоскут кожи были аккуратно иссечены в течение часа после эвтаназии. В течение этого времени образц.......
Поскольку этот протокол направлен на максимальную свежесть, некоторые образцы могут содержать нежелательные ткани. Например, гепатопанкреатический проток и некоторые брыжейки берутся вместе с поджелудочной железой, а некоторая перитонеальная ткань, надпочечники и мочеточники всегд.......
Эта работа была поддержана грантом OD R24OD031956 NIH. Мы благодарим Саманту Джалберт, Джилл Ралстон и Кору Андерсон за их помощь и поддержку, а также нашего редактора и анонимных рецензентов за их полезные отзывы
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
5x Magnifying Glass with LED Light and Stand | amazon.com | B08QJ6J8P1 | light must not produce heat |
Disposable Transfer Pipets | VWR | 414004-036 | |
Dissecting Fine-Pointed Forceps | Fisher Scinetific | 08-875 | |
Dissecting scissors sharp piont, straight 6.5" | VWR | 76457-374 | |
Dissection Tray | Fisher Scinetific | 14-370-284 | styrofoam sheets are an acceptable alternative |
Euthanasia container | US Plastic | Item 2860 | alternative opaque containers acceptable |
Euthanasia container lid | US Plastic | Item 3047 | |
Iridectomy Scissors 6" | vwr | 470018-938 | iris scissors are an acceptable alternative |
MS-222: Syncaine (formerly tricaine) | Pentair AES | TRS1 | |
PBS 1x | Corning | 21-040-CV | |
Sodium Bicarbonate, Powder, USP | Fisher Scientific | 18-606-333 | |
Specimen Forceps, Serrated | VWR | 82027-442 | |
T-Pins for Dissecting | Fisher Scinetific | S99385 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved