एचआईवी -1 संक्रमित टी-कोशिकाओं में एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम तनाव और अनफोल्डेड प्रोटीन प्रतिक्रिया को मापना और एचआईवी -1 प्रतिकृति में इसकी भूमिका का विश्लेषण करना

वायरल संक्रमण असामान्य प्रोटीन संचय के कारण एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम (ईआर) तनाव पैदा कर सकता है, जिससे अनफोल्डेड प्रोटीन रिस्पांस (यूपीआर) हो सकता है। वायरस ने मेजबान यूपीआर में हेरफेर करने के लिए रणनीति विकसित की है, लेकिन साहित्य में एचआईवी -1 संक्रमण के दौरान यूपीआर मॉड्यूलेशन और इसके कार्यात्मक महत्व की विस्तृत समझ की कमी है। इस संदर्भ में, वर्तमान लेख टी-कोशिकाओं में एचआईवी -1 संक्रमण के दौरान ईआर तनाव के स्तर और यूपीआर को मापने के लिए हमारी प्रयोगशाला में उपयोग किए जाने वाले प्रोटोकॉल और वायरल प्रतिकृति और संक्रामकता पर यूपीआर के प्रभाव का वर्णन करता है।

थियोफ्लेविन टी (टीएचटी) धुंधला एक अपेक्षाकृत नई विधि है जिसका उपयोग प्रोटीन समुच्चय का पता लगाकर कोशिकाओं में ईआर तनाव का पता लगाने के लिए किया जाता है। यहां, हमने ईआर तनाव का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए एचआईवी -1 संक्रमित कोशिकाओं में टीएचटी धुंधला के लिए प्रोटोकॉल का वर्णन किया है। इसके अलावा, ईआर तनाव को अप्रत्यक्ष रूप से बीआईपी, फॉस्फोराइलेटेड आईआरई 1, पर्क, और ईआईएफ 2α जैसे यूपीआर मार्करों के स्तर को मापकर, एक्सबीपी 1 की स्प्लिसिंग, एटीएफ 6 की दरार, एटीएफ 4, सीएचओपी, और एचआईवी -1 संक्रमित कोशिकाओं में जीएडीडी 34 का विखंडन, पारंपरिक इम्यूनोब्लोटिंग और मात्रात्मक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (आरटी-पीसीआर) का उपयोग करके भी पता लगाया गया था। हमने पाया है कि टीएचटी-प्रतिदीप्ति यूपीआर सक्रियण के संकेतकों से संबंधित है। यह लेख भी नॉकडाउन प्रयोगों के साथ-साथ औषधीय अणुओं के उपयोग द्वारा एचआईवी -1 प्रतिकृति पर ईआर तनाव और यूपीआर मॉडुलन के प्रभाव का विश्लेषण करने के लिए प्रोटोकॉल प्रदर्शित करता है। एचआईवी -1 जीन अभिव्यक्ति / प्रतिकृति और वायरस उत्पादन पर यूपीआर के प्रभाव का विश्लेषण क्रमशः लूसिफ़ेरेज़ रिपोर्टर परख और पी 24 एंटीजन कैप्चर एलिसा द्वारा किया गया था, जबकि संक्रमित रिपोर्टर कोशिकाओं के धुंधला होने से विषाणु संक्रामकता पर प्रभाव का विश्लेषण किया गया था। सामूहिक रूप से, तरीकों का यह सेट एचआईवी -1 संक्रमण के दौरान अनफोल्डेड प्रोटीन रिस्पांस मार्गों की व्यापक समझ प्रदान करता है, इसकी जटिल गतिशीलता का खुलासा करता है।