A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Здесь мы представляем протокол фибриноген-полиакриламидного гель-электрофореза (PAGE) для быстрого разделения и отображения фибриногенолитических агентов Sipunculus nudus.
Фибриногенолитические агенты, которые могут растворять фибриноген напрямую, широко используются в антикоагулянтной терапии. Как правило, идентификация новых фибриногенолитических агентов требует сначала разделения каждого компонента, а затем проверки их фибриногенолитической активности. В настоящее время на стадии разделения в основном используются электрофорез в полиакриламидном геле (PAGE) и хроматография. Между тем, анализ фибриногенных пластин и продукты реакции на основе PAGE обычно используются для демонстрации их фибриногенолитической активности. Однако из-за пространственно-временного разделения этих двух стадий невозможно разделить и отобразить активные фибриногенлитические агенты с одним и тем же гелем. Чтобы упростить процессы разделения и отображения идентификации фибриногенолитических агентов, мы разработали новый метод fibrinogen-PAGE для быстрого разделения и отображения фибриногенолитических агентов арахисовых червей (Sipunculus nudus) в этом исследовании. Этот метод включает в себя получение фибриногена-PAGE, электрофорез, ренатурацию, инкубацию, окрашивание и обесцвечивание. Фибриногенолитическая активность и молекулярная масса белка могут быть обнаружены одновременно. С помощью этого метода мы успешно обнаружили более одного активного фибриногенолитического агента гомогената арахисового червя в течение 6 ч. Кроме того, этот метод fibrinogen-PAGE экономит время и деньги. Кроме того, этот метод может быть использован для изучения фибриногенлитических агентов других организмов.
В последние годы, в связи с продолжающимся ростом тромботических заболеваний, тромботические заболевания стали новойсерьезной глобальной проблемой здравоохранения1. В настоящее время антитромботические препараты классифицируются на три группы: антитромбоцитарные агрегирующие препараты, антикоагулянты и тромболитические препараты. Среди них тромболитические препараты, такие как урокиназа (Великобритания), тканевый активатор плазминогена (tPA) и др., являются единственными клинически применяемыми препаратами, способными гидролизовать тромб2. Между тем, разрабатываются более безопасные и эф....
1. Гомогенат арахисового червя
После электрофореза все полосы маркера были четко отображены. На 1x полосах загрузки SDS-PAGE была только полоса 10 кДа (бромфенольный синий). В образцах sFE и арахисового червя не было обнаружено каких-либо наблюдаемых полос (Рисунок 1). Несмотря на то, что пол?.......
sFE - это новый фибрино(гено)литический фермент, выделенный из арахисовых червей нашей командой ранее 3,6,8,13. Тем не менее, процессы идентификации sFE были трудоемкими и трудоемкими, включая определение .......
У авторов нет конфликта интересов, который можно было бы раскрыть.
Это исследование финансировалось Научно-техническим бюро города Сямынь (No 3502Z20227197), Бюро науки и технологий провинции Фуцзянь (No 2019J01070; No 2022J01311) и проект «Инновации и предпринимательство высокого уровня» Плана науки и техники Цюаньчжоу (No 2022C015R). Мы благодарим Фуцай Вана (Университет Хуацяо) и Лэй Туна (Университет Хуацяо) за их техническую помощь.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1 M Tris-HCl (pH 6.8) | Solarbio | T1020 | |
1.5 M Tris-HCl (pH 8.8) | Solarbio | T1010 | |
30% Acrylamide/Bis-acrylamide | Biosharp | BL513B | |
Ammonium persulfate | XiLONG SCIENTIFIC | 7727-54-0 | |
Beaker | PYREX | 2-9425-02 | |
Centrifuge Tube (1.5 mL) | Biosharp | BS-15-M | |
Constant Temperature Incubator | JINGHONG | JHS-400 | |
Coomas Brillant Blue Stainning solution | Beyotime | P0017F | |
Electronic Analytical Balance | DENVER | TP-213 | |
Fibrinogen | Solarbio | F8051 | |
Gel loading pipette tips, Bulk | Biosharp | BS-200-GTB | |
Homogenizer | AHS | ATS-1500 | |
Horizontal rotation oscillator | NuoMi | NMSP-600 | |
Milli-Q Reference | Millipore | Z00QSV0CN | |
Mini-PROTEAN Tetra Cell | BIO-RAD | 165-8000~165-8007 | |
N,N,N',N'-Tetramethylethylenediamine | Sigma | T9281 | |
Pipette Tip (1 mL) | Axygene | T-1000XT-C | |
Pipette Tip (10 µL) | Axygene | T-10XT-C | |
Pipette Tip (200 µL) | Axygene | T-200XT-C | |
Pipettor (1 mL) | Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
Pipettor (10µL) | Thermo Fisher Scientific | ZX98775 | |
Pipettor (200 µL) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
Pipettor (50 µL) | Thermo Fisher Scientific | ZY15331 | |
Refrigerated Centrifuge | cence | H1650R | |
Sodium dodecyl sulfate | Sigma-Aldrich | V900859 | |
Tris | Solarbio | T8060 | |
Tris-HCl | Solarbio | T8230 | |
Triton X-100 | Solarbio | T8200 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved