A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
פרוטוקול זה מתאר את כל ההליכים, החל מגידול תאי גזע מזנכימליים שמקורם בשומן אנושי (ADSCs) ואיסוף סופרנאטנט ועד לחילוץ בועיות חוץ-תאיות (EVs) באמצעות אולטרה-צנטריפוגה.
תאי גזע מזנכימליים שמקורם בשומן אנושי (ADSCs) יכולים לקדם התחדשות ושחזור של רקמות ואיברים שונים. מחקרים אחרונים מצביעים על כך שניתן לייחס את תפקודם הרגנרטיבי למגע בין תאים ולהשפעות פרקריניות של תאים. האפקט הפרקריני הוא דרך חשובה לתאים לתקשר ולהעביר מידע למרחקים קצרים, שבהם שלפוחיות חוץ-תאיות (EVs) ממלאות תפקיד פונקציונלי כנשאיות. קיים פוטנציאל משמעותי ל-ADSC EVs ברפואה רגנרטיבית. מחקרים רבים דיווחו על יעילותן של שיטות אלה. כיום מתוארות שיטות שונות לחילוץ ובידוד כלי רכב חשמליים המבוססות על עקרונות כגון צנטריפוגה, משקעים, גודל מולקולרי, זיקה ומיקרופלואידיקה. אולטרה-צנטריפוגה נחשבת לתקן הזהב לבידוד כלי רכב חשמליים. עם זאת, פרוטוקול קפדני להדגשת אמצעי זהירות במהלך אולטרה-צנטריפוגה עדיין נעדר. מחקר זה מציג את המתודולוגיה והצעדים המכריעים הכרוכים בתרבות ADSC, איסוף סופרנאטנטים ואולטרה-צנטריפוגה של כלי רכב חשמליים. עם זאת, למרות שאולטרה-צנטריפוגה היא חסכונית ואינה דורשת טיפול נוסף, עדיין ישנם כמה חסרונות בלתי נמנעים, כגון שיעור התאוששות נמוך וצבירת רכב חשמלי.
רוב ADSCs נגזרים מרקמת השומן והוכחו כמקדמים התחדשות ושחזור של רקמות ואיברים שונים, כולל שריר הלב, העצם והעור1. מחקרים אחרונים מצביעים על כך שהתפקוד הרגנרטיבי של ADSCs עשוי לנבוע ממגע בין-תאי ומההשפעות הפרקריניות של התאים2. האפקט הפרקריני הוא אמצעי חשוב עבור תאים לתקשר ולהעביר מידע על פני מרחקים קצרים, ופונקציה זו מושגת באמצעות שלפוחיות חוץ-תאיות (EVs).
כלי רכב חשמליים הם מבני קרום דו-שכבתיים המיוצרים על ידי תאים, בקוטר הנע בין 40 ננומטר ל-160 ננומטר (עם ממוצע של כ-100 ננומטר). הם משפיעים על תפקודים תאיים שונים, כגון ייצור ציטוקינים, התפשטות תאים, אפופטוזיס ומטבוליזם
הסקירה הכללית של שלבי הפרוטוקול מוצגת באיור 1. פרטי הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר מפורטים בטבלת החומרים.
1. הכנת מדיה
ראשית, ADSCs אופיינו וזוהו, כולל המורפולוגיה10 שלהם ונוגדנים פני השטח. בהתבסס על איור 2A, נראה ש-ADSCs מסודרים בצורת ציר ויוצרים מערבולת לאחר צמיחה צפופה. התאים בתרבית התמינו לתאים אדיפוגניים, אוסטאוגניים וכונדרוגניים ונצבעו באדום שמן O, אדום אליזרין וכחול אלקיאן
במהלך תהליך הניסוי הפורמלי, מספר נקודות הן קריטיות להשגת תוצאות הניסוי הטובות ביותר. בהתבסס על ניסיון העבר שלנו, מומלץ לבחור במעבר 3-6 ADSCs, מכיוון שהם מבטיחים את מצב התא הטוב ביותר האפשרי. לפני P3, ייתכן שתאי דם אדומים, תאי אנדותל ותאים שונים אחרים לא נבדקו. לאחר P6, התאים עשויים להזדקן בהדרגה, מ?.......
עבודה זו נתמכה חלקית על ידי הקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (82202473).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acrodisc Needle Filter of Supor Membrane | Acros Organics | 4652 | 0.22 μm |
Basal Medium For Cell Culture | OriCell | BHDM-03011 | |
Fetal Bovine Serum Without EXO + Culture Supplement (For Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells) | OriCell | HUXMD-05002 | |
Inverted Microscope | OLYMPUS | Lx70-S8F2 | |
Low Speed Centrifuge | Anhui USTC Zonkia Scientific Instruments Co.,Ltd. | SC-3612 | |
Normocin | InvivoGen | ant-nr-05 | |
Optima Max-XP Tabletop Ultracentrifuge | Beckman Coulter | 393315 | |
Penicillin-Streptomycin-Gentamicin Solution (100x) | Solarbio | P1410 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved