A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Этот протокол описывает все процедуры, от культивирования мезенхимальных стволовых клеток (ADSC) человека, полученных из жировой ткани, и сбора надосадочной жидкости до экстракции внеклеточных везикул (ВВ) с помощью ультрацентрифугирования.
Мезенхимальные стволовые клетки (ADSC) человека, полученные из жировой ткани, могут способствовать регенерации и реконструкции различных тканей и органов. Недавние исследования показывают, что их регенеративная функция может быть связана с межклеточным контактом и клеточными паракринными эффектами. Паракринный эффект является важным способом взаимодействия клеток и передачи информации на короткие расстояния, в которых внеклеточные везикулы (ВВ) играют функциональную роль в качестве носителей. Существует значительный потенциал для ADSC EV в регенеративной медицине. В многочисленных исследованиях сообщалось об эффективности этих методов. В настоящее время описываются различные методы экстракции и изоляции ВВ, основанные на таких принципах, как центрифугирование, осаждение, размер молекул, аффинность и микрофлюидика. Ультрацентрифугирование считается золотым стандартом для изоляции электромобилей. Тем не менее, тщательный протокол, подчеркивающий меры предосторожности во время ультрацентрифугирования, до сих пор отсутствует. В этом исследовании представлена методология и важнейшие этапы, связанные с культивированием ADSC, сбором надосадочной жидкости и ультрацентрифугированием EV. Однако, несмотря на то, что ультрацентрифугирование является экономически эффективным и не требует дополнительной обработки, все же есть некоторые неизбежные недостатки, такие как низкая скорость восстановления и агрегация EV.
Большинство ADSC получают из жировой ткани и, как было продемонстрировано, способствуют регенерации и реконструкции различных тканей и органов, включая миокард, кости и кожу1. Недавние исследования показывают, что регенеративная функция ADSC может быть обусловлена межклеточным контактом и паракринными эффектамиклеток. Паракринный эффект является важным средством взаимодействия клеток и передачи информации на короткие расстояния, и эта функция достигается за счет внеклеточных везикул (ВВ).
ВВ представляют собой двухслойные мембранные структуры, производимые клетками, диаметром от 40 нм до 160 н....
Обзор этапов протокола показан на рисунке 1. Подробная информация о реактивах и оборудовании, использованных в исследовании, приведена в Таблице материалов.
1. Подготовка СМИ
Во-первых, были охарактеризованы и идентифицированы ADSC, включая их морфологию10 и поверхностные антитела. Исходя из рисунка 2А, видно, что ADSC расположены в форме веретена и образуют вихрь после плотного роста. Культивируемые клетки дифференцировали в адипог?.......
В ходе формального экспериментального процесса несколько моментов имеют решающее значение для достижения наилучших экспериментальных результатов. Исходя из нашего предыдущего опыта, рекомендуется выбирать 3-6 ADSC, так как они обеспечивают наилучшее возможное состояние клеток. До P3 эр?.......
Авторы не имеют финансового интереса, чтобы заявить об этом.
Эта работа была частично поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (82202473).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Acrodisc Needle Filter of Supor Membrane | Acros Organics | 4652 | 0.22 μm |
Basal Medium For Cell Culture | OriCell | BHDM-03011 | |
Fetal Bovine Serum Without EXO + Culture Supplement (For Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells) | OriCell | HUXMD-05002 | |
Inverted Microscope | OLYMPUS | Lx70-S8F2 | |
Low Speed Centrifuge | Anhui USTC Zonkia Scientific Instruments Co.,Ltd. | SC-3612 | |
Normocin | InvivoGen | ant-nr-05 | |
Optima Max-XP Tabletop Ultracentrifuge | Beckman Coulter | 393315 | |
Penicillin-Streptomycin-Gentamicin Solution (100x) | Solarbio | P1410 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved