Påvisning af CD40-protein-umbelliferon-interaktion via differentiel scanningsfluorescens

Undersøgelsen af interaktioner mellem forskellige molekyler er et afgørende aspekt af forståelsen af sygdomspatogenese og screening for lægemiddelmål. Umbelliferon, en aktiv ingrediens i tibetansk medicin Vicatia thibetica, udviser en immunmodulerende virkning med en ukendt mekanisme. CD40-proteinet er et nøglemål i immunresponset. Derfor anvender denne undersøgelse princippet om differentiel scanningsfluorescensteknologi til at analysere interaktionerne mellem CD40-protein og umbelliferon ved hjælp af fluorescerende enzymmarkører. Oprindeligt blev stabiliteten af proteinet fluorescerende orange farvestof eksperimentelt verificeret, og det optimale fortyndingsforhold på 1:500 blev bestemt. Efterfølgende blev det observeret, at temperatursmelteværdien (Tm) af CD40-protein havde en tendens til at falde med en stigning i koncentrationen. Interessant nok viste interaktionen mellem CD40-protein og umbelliferon sig at forbedre den termiske stabilitet af CD40-protein. Denne undersøgelse repræsenterer det første forsøg på at detektere bindingspotentialet af små molekyleforbindelser og proteiner ved hjælp af fluorescensmikroplader og fluorescerende farvestoffer. Teknikken er kendetegnet ved høj følsomhed og nøjagtighed, lovende fremskridt inden for proteinstabilitet, proteinstruktur og protein-ligand-interaktioner, hvilket letter yderligere forskning og udforskning.