Nachweis der CD40-Protein-Umbelliferon-Wechselwirkung mittels dynamischer Differenzialfluoreszenz

Die Untersuchung von Wechselwirkungen zwischen verschiedenen Molekülen ist ein entscheidender Aspekt für das Verständnis der Krankheitspathogenese und das Screening auf Wirkstoffziele. Umbelliferon, ein Wirkstoff der tibetischen Medizin Vicatia thibetica, zeigt eine immunmodulatorische Wirkung mit einem unbekannten Mechanismus. Das CD40-Protein ist ein wichtiges Ziel bei der Immunantwort. Daher wird in dieser Studie das Prinzip der dynamischen Differenzialfluoreszenztechnologie verwendet, um die Wechselwirkungen zwischen dem CD40-Protein und Umbelliferon unter Verwendung von fluoreszierenden Enzymmarkern zu analysieren. Zunächst wurde die Stabilität des Proteins fluoreszierender orangefarbener Farbstoff experimentell verifiziert und das optimale Verdünnungsverhältnis von 1:500 bestimmt. In der Folge wurde beobachtet, dass der Temperaturschmelzwert (Tm) des CD40-Proteins mit zunehmender Konzentration tendenziell abnahm. Interessanterweise wurde festgestellt, dass die Wechselwirkung zwischen CD40-Protein und Umbelliferon die thermische Stabilität des CD40-Proteins verbessert. Diese Studie stellt den ersten Versuch dar, das Bindungspotenzial von niedermolekularen Verbindungen und Proteinen mit Hilfe von Fluoreszenz-Mikrotiterplatten und Fluoreszenzfarbstoffen nachzuweisen. Die Technik zeichnet sich durch eine hohe Sensitivität und Genauigkeit aus und verspricht Fortschritte in den Bereichen Proteinstabilität, Proteinstruktur und Protein-Liganden-Wechselwirkungen, wodurch weitere Forschungen und Explorationen erleichtert werden.