Påvisning av CD40-protein-umbelliferon-interaksjon via differensiell skanningsfluorescens

Undersøkelsen av interaksjoner mellom ulike molekyler er et avgjørende aspekt for å forstå sykdomspatogenese og screening for legemiddelmål. Umbelliferon, en aktiv ingrediens i tibetansk medisin Vicatia thibetica, viser en immunmodulerende effekt med en ukjent mekanisme. CD40-proteinet er et nøkkelmål i immunresponsen. Derfor bruker denne studien prinsippet om differensiell skanningsfluorescensteknologi for å analysere interaksjonene mellom CD40-protein og umbelliferon ved hjelp av fluorescerende enzymmarkører. Opprinnelig ble stabiliteten til proteinet fluorescerende oransje fargestoff eksperimentelt verifisert, og det optimale fortynningsforholdet på 1:500 ble bestemt. Deretter ble det observert at temperatursmelteverdien (Tm) av CD40-protein hadde en tendens til å synke med en økning i konsentrasjonen. Interessant nok ble interaksjonen mellom CD40-protein og umbelliferon funnet å forbedre den termiske stabiliteten til CD40-protein. Denne studien representerer det første forsøket på å oppdage bindingspotensialet til småmolekylære forbindelser og proteiner ved bruk av fluorescensmikroplater og fluorescerende fargestoffer. Teknikken er preget av høy følsomhet og nøyaktighet, lovende fremskritt innen proteinstabilitet, proteinstruktur og protein-ligand-interaksjoner, og legger dermed til rette for videre forskning og utforskning.