Detecção da interação proteína-umbeliferona CD40 por fluorescência de varredura diferencial

A investigação das interações entre diferentes moléculas é um aspecto crucial para a compreensão da patogênese da doença e a triagem de alvos de drogas. A umbeliferona, um ingrediente ativo da medicina tibetana Vicatia thibetica, exibe um efeito imunomodulador com um mecanismo desconhecido. A proteína CD40 é um alvo chave na resposta imune. Portanto, este estudo emprega o princípio da tecnologia de fluorescência de varredura diferencial para analisar as interações entre a proteína CD40 e a umbeliferona usando marcadores enzimáticos fluorescentes. Inicialmente, a estabilidade do corante laranja fluorescente proteico foi verificada experimentalmente e a razão de diluição ótima de 1:500 foi determinada. Posteriormente, observou-se que o valor de fusão da temperatura (Tm) da proteína CD40 tendeu a diminuir com o aumento da concentração. Curiosamente, descobriu-se que a interação entre a proteína CD40 e a umbeliferona aumenta a estabilidade térmica da proteína CD40. Este estudo representa a primeira tentativa de detectar o potencial de ligação de compostos e proteínas de moléculas pequenas usando microplacas de fluorescência e corantes fluorescentes. A técnica é caracterizada por alta sensibilidade e precisão, prometendo avanços nos campos de estabilidade de proteínas, estrutura de proteínas e interações proteína-ligante, facilitando assim pesquisas e explorações futuras.