Detektion av CD40-protein-umbelliferoninteraktion via differentiell skanningsfluorescens

Undersökningen av interaktioner mellan olika molekyler är en viktig aspekt för att förstå sjukdomspatogenes och screening för läkemedelsmål. Umbelliferon, en aktiv ingrediens i den tibetanska medicinen Vicatia thibetica, uppvisar en immunmodulerande effekt med en okänd mekanism. CD40-proteinet är ett viktigt mål i immunsvaret. Därför använder denna studie principen om differentiell skanningsfluorescensteknik för att analysera interaktionerna mellan CD40-protein och umbelliferon med hjälp av fluorescerande enzymmarkörer. Inledningsvis verifierades stabiliteten hos proteinet fluorescerande orange färgämne experimentellt, och det optimala spädningsförhållandet på 1:500 bestämdes. Därefter observerades att temperatursmältningsvärdet (Tm) för CD40-protein tenderade att minska med en ökning i koncentration. Intressant nog visade det sig att interaktionen mellan CD40-protein och umbelliferon förbättrade den termiska stabiliteten hos CD40-proteinet. Denna studie representerar det första försöket att detektera bindningspotentialen hos småmolekylära föreningar och proteiner med hjälp av fluorescensmikroplattor och fluorescerande färgämnen. Tekniken kännetecknas av hög känslighet och noggrannhet, vilket lovar framsteg inom områdena proteinstabilitet, proteinstruktur och protein-ligandinteraktioner, vilket underlättar ytterligare forskning och utforskning.