בידוד ותרבית של תאי אפיתל ראשוניים של חלב אנושי

Summary

המחקר הנוכחי מדווח על פרוטוקול קל יותר, חוסך זמן וחסכוני לבידוד וגידול יעיל של תאי אפיתל חלב אנושיים ראשוניים (HMECs) מכמויות קטנות של רקמת חלב. פרוטוקול זה מתאים לייצור מהיר של HMECs ראשוניים הן ליישומים מעבדתיים והן ליישומים קליניים.

Abstract

בלוטת החלב היא מבנה בסיסי של השד וממלאת תפקיד חיוני ברבייה. תאי אפיתל חלב אנושיים (HMECs), שהם תאי המקור של סרטן השד ומחלות דלקתיות אחרות הקשורות לשד, זכו לתשומת לב רבה. עם זאת, בידוד וטיפוח של HMECs ראשוניים במבחנה למטרות מחקר היה מאתגר בשל אופיים המובחן והקרטיני ותוחלת החיים הקצרה שלהם. לכן, פיתוח שיטה פשוטה ויעילה לבידוד ותרבית של קופות חולים הוא בעל ערך מדעי רב לחקר ביולוגיה של השד ומחלות הקשורות לשד. במחקר זה, בודדנו בהצלחה HMECs ראשוניים מכמויות קטנות של רקמת חלב על ידי עיכול עם תערובת של אנזימים בשילוב עם תרבית ראשונית בסרום בקר עוברי 5% DMEM המכיל מעכב קינאז הקשור לרו (ROCK) Y-27632, ולאחר מכן הרחבת תרבית בתווך קרטינוציטים ללא סרום. גישה זו מקדמת באופן סלקטיבי את הצמיחה של תאי אפיתל, וכתוצאה מכך תפוקת תאים אופטימלית. הפשטות והנוחות של שיטה זו הופכות אותה למתאימה הן למחקר מעבדה והן למחקר קליני, אשר אמור לספק תובנות חשובות בתחומי מחקר חשובים אלה.

Introduction

סרטן השד הוא סוג הסרטן העיקרי המאובחן אצל נשים ברחבי העולם והוא הגורם העיקרי למוות מסרטן¹. הפתוגנזה של סרטן השד היא מורכבת, וכוללת גורמים רבים כגון גנטיקה, סביבה ואורח חיים. HMECs, תאים פעילים מייצרי חלב, הם אחד המרכיבים החשובים ביותר של רקמת החלב וככל הנראה הם התאים המקוריים המעורבים בקרצינוגנזה של סרטן השד. לכן, HMECs קיבלו את מירב תשומת הלב מהחוקרים לחקר סרטן השד². יתר על כן, לתאים ראשוניים יש את היכולת לספק אפיון רלוונטי ביולוגית של תהליכים תאיים מורכבים בשל אגירתם של יציבות גנטית, מורפולוגיה נורמלית, ומערך שלם יותר של תפקודים תאיים בסיסיים שלא ניתן להשיג עם קווי תאים אימורטליים³. לפיכך, הבידו....

Protocol

רקמות חלב נורמליות טריות המשמשות בפרוטוקול זה נאספות מניתוח סביב הנגע של דלקת שד לובולרית גרנולומטית עקשנית בבית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית הסינית ג'ג'יאנג על פי הנחיות ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית הסינית ג'ג'יאנג (פרוטוקול מס '. .......

Discussion

HMECs חיוניים לשמירה על השלמות האנטומית והתפקודית של רקמת החלב והם שימושיים בחקירות מדעיות, יישומים קליניים ותחומים קשורים¹⁵. תאי אפיתל ראשוניים הם סוג של תאים מיוחדים בעלי מעברים מוגבלים ותוחלת חיים קצרה יותר. עם זאת, הצמיחה של HMECs עוכבה על ידי אילוצים טכניים, אשר כתוצאה מכך עיכ?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin	Basalmedia	K431010	For HMECs  dissociation
1.5 mL microcentrifuge Tubes	NEST	081722CK01	For cell digestion
100 µm mesh filter	Solarbio	431752	For HMECs filtration
100 mm Cell Culture Dish	Corning	430167	For cell culture
4% paraformaldehyde	solarbio	P1110-100ml	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
50 mL Centrifuge Tube	Corning	430829	For cell centrifugation
Cell Strainer	Solarbio	431752	Cell filtration
Centrifuge	Eppendorf	5404HN133048	Cell centrifuge
CO2 Incubator	Thermo Scientific	42820906	For cell incubation
Collagenase Type I	Merck	SKU:SCR103	For HMECs isolation
Dispase	Solarbio	CAS:42613-33-2	For HMECs isolation
DMEM	Gibco	8122622	Component of neutralization medium
Fetal Bovine Serum	Gibco	2556132P	Component of neutralization medium
Penicillin/Streptomycin	Thermo Scientific	15140-122	Antibiotics
Phosphate buffered solution	Tecono	20201033	Washing solution
rabbit anti CK7	abcam	ab68459	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
rabbit anti GATA3	abcam	ab199428	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
Y-27632	Solarbio	IY0040	ROCK inhibitor