A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
המחקר הנוכחי מדווח על פרוטוקול קל יותר, חוסך זמן וחסכוני לבידוד וגידול יעיל של תאי אפיתל חלב אנושיים ראשוניים (HMECs) מכמויות קטנות של רקמת חלב. פרוטוקול זה מתאים לייצור מהיר של HMECs ראשוניים הן ליישומים מעבדתיים והן ליישומים קליניים.
בלוטת החלב היא מבנה בסיסי של השד וממלאת תפקיד חיוני ברבייה. תאי אפיתל חלב אנושיים (HMECs), שהם תאי המקור של סרטן השד ומחלות דלקתיות אחרות הקשורות לשד, זכו לתשומת לב רבה. עם זאת, בידוד וטיפוח של HMECs ראשוניים במבחנה למטרות מחקר היה מאתגר בשל אופיים המובחן והקרטיני ותוחלת החיים הקצרה שלהם. לכן, פיתוח שיטה פשוטה ויעילה לבידוד ותרבית של קופות חולים הוא בעל ערך מדעי רב לחקר ביולוגיה של השד ומחלות הקשורות לשד. במחקר זה, בודדנו בהצלחה HMECs ראשוניים מכמויות קטנות של רקמת חלב על ידי עיכול עם תערובת של אנזימים בשילוב עם תרבית ראשונית בסרום בקר עוברי 5% DMEM המכיל מעכב קינאז הקשור לרו (ROCK) Y-27632, ולאחר מכן הרחבת תרבית בתווך קרטינוציטים ללא סרום. גישה זו מקדמת באופן סלקטיבי את הצמיחה של תאי אפיתל, וכתוצאה מכך תפוקת תאים אופטימלית. הפשטות והנוחות של שיטה זו הופכות אותה למתאימה הן למחקר מעבדה והן למחקר קליני, אשר אמור לספק תובנות חשובות בתחומי מחקר חשובים אלה.
סרטן השד הוא סוג הסרטן העיקרי המאובחן אצל נשים ברחבי העולם והוא הגורם העיקרי למוות מסרטן1. הפתוגנזה של סרטן השד היא מורכבת, וכוללת גורמים רבים כגון גנטיקה, סביבה ואורח חיים. HMECs, תאים פעילים מייצרי חלב, הם אחד המרכיבים החשובים ביותר של רקמת החלב וככל הנראה הם התאים המקוריים המעורבים בקרצינוגנזה של סרטן השד. לכן, HMECs קיבלו את מירב תשומת הלב מהחוקרים לחקר סרטן השד2. יתר על כן, לתאים ראשוניים יש את היכולת לספק אפיון רלוונטי ביולוגית של תהליכים תאיים מורכבים בשל אגירתם של יציבות גנטית, מורפולוגיה נורמלית, ומערך שלם יותר של תפקודים תאיים בסיסיים שלא ניתן להשיג עם קווי תאים אימורטליים3. לפיכך, הבידו....
רקמות חלב נורמליות טריות המשמשות בפרוטוקול זה נאספות מניתוח סביב הנגע של דלקת שד לובולרית גרנולומטית עקשנית בבית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית הסינית ג'ג'יאנג על פי הנחיות ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית הסינית ג'ג'יאנג (פרוטוקול מס '. .......
איור 1 מציג סכמה של ההליך. הפרוטוקול כולל שימוש בשילוב של אנזימים, כלומר דיספאז, קולגנאז וטריפסין. שילוב זה מנוצל לצורך ניתוק יריעת האפיתל משכבת הפיברובלסטים שמתחתיה ולאחר מכן שימוש בטריפסין לניתוק תאי אפיתל החלב לתרחיף. בנוסף, הצמיחה של תאי אפיתל קודמה ביעילות על ידי הוספ?.......
HMECs חיוניים לשמירה על השלמות האנטומית והתפקודית של רקמת החלב והם שימושיים בחקירות מדעיות, יישומים קליניים ותחומים קשורים15. תאי אפיתל ראשוניים הם סוג של תאים מיוחדים בעלי מעברים מוגבלים ותוחלת חיים קצרה יותר. עם זאת, הצמיחה של HMECs עוכבה על ידי אילוצים טכניים, אשר כתוצאה מכך עיכ?.......
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מתוכנית המדע והטכנולוגיה TCM של מחוז ג'ג'יאנג, סין (2017ZA055; 2018ZA036), ופרויקט המדע והטכנולוגיה של Zunyi, מחוז Guizhou, סין (Zunyi City Kehe Support NS (2020) No. 18) ל- X. Xu. המחברים מודים למעבדה לביולוגיה מולקולרית של חברת הטכנולוגיה הביו-רפואית Youjia (Hangzhou) על מתן הכשרה בתרביות תאים.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.05% Trypsin | Basalmedia | K431010 | For HMECs dissociation |
1.5 mL microcentrifuge Tubes | NEST | 081722CK01 | For cell digestion |
100 µm mesh filter | Solarbio | 431752 | For HMECs filtration |
100 mm Cell Culture Dish | Corning | 430167 | For cell culture |
4% paraformaldehyde | solarbio | P1110-100ml | For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs |
50 mL Centrifuge Tube | Corning | 430829 | For cell centrifugation |
Cell Strainer | Solarbio | 431752 | Cell filtration |
Centrifuge | Eppendorf | 5404HN133048 | Cell centrifuge |
CO2 Incubator | Thermo Scientific | 42820906 | For cell incubation |
Collagenase Type I | Merck | SKU:SCR103 | For HMECs isolation |
Dispase | Solarbio | CAS:42613-33-2 | For HMECs isolation |
DMEM | Gibco | 8122622 | Component of neutralization medium |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 2556132P | Component of neutralization medium |
Penicillin/Streptomycin | Thermo Scientific | 15140-122 | Antibiotics |
Phosphate buffered solution | Tecono | 20201033 | Washing solution |
rabbit anti CK7 | abcam | ab68459 | For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs |
rabbit anti GATA3 | abcam | ab199428 | For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs |
Y-27632 | Solarbio | IY0040 | ROCK inhibitor |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved