Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

המחקר הנוכחי מדווח על פרוטוקול קל יותר, חוסך זמן וחסכוני לבידוד וגידול יעיל של תאי אפיתל חלב אנושיים ראשוניים (HMECs) מכמויות קטנות של רקמת חלב. פרוטוקול זה מתאים לייצור מהיר של HMECs ראשוניים הן ליישומים מעבדתיים והן ליישומים קליניים.

Abstract

בלוטת החלב היא מבנה בסיסי של השד וממלאת תפקיד חיוני ברבייה. תאי אפיתל חלב אנושיים (HMECs), שהם תאי המקור של סרטן השד ומחלות דלקתיות אחרות הקשורות לשד, זכו לתשומת לב רבה. עם זאת, בידוד וטיפוח של HMECs ראשוניים במבחנה למטרות מחקר היה מאתגר בשל אופיים המובחן והקרטיני ותוחלת החיים הקצרה שלהם. לכן, פיתוח שיטה פשוטה ויעילה לבידוד ותרבית של קופות חולים הוא בעל ערך מדעי רב לחקר ביולוגיה של השד ומחלות הקשורות לשד. במחקר זה, בודדנו בהצלחה HMECs ראשוניים מכמויות קטנות של רקמת חלב על ידי עיכול עם תערובת של אנזימים בשילוב עם תרבית ראשונית בסרום בקר עוברי 5% DMEM המכיל מעכב קינאז הקשור לרו (ROCK) Y-27632, ולאחר מכן הרחבת תרבית בתווך קרטינוציטים ללא סרום. גישה זו מקדמת באופן סלקטיבי את הצמיחה של תאי אפיתל, וכתוצאה מכך תפוקת תאים אופטימלית. הפשטות והנוחות של שיטה זו הופכות אותה למתאימה הן למחקר מעבדה והן למחקר קליני, אשר אמור לספק תובנות חשובות בתחומי מחקר חשובים אלה.

Introduction

סרטן השד הוא סוג הסרטן העיקרי המאובחן אצל נשים ברחבי העולם והוא הגורם העיקרי למוות מסרטן1. הפתוגנזה של סרטן השד היא מורכבת, וכוללת גורמים רבים כגון גנטיקה, סביבה ואורח חיים. HMECs, תאים פעילים מייצרי חלב, הם אחד המרכיבים החשובים ביותר של רקמת החלב וככל הנראה הם התאים המקוריים המעורבים בקרצינוגנזה של סרטן השד. לכן, HMECs קיבלו את מירב תשומת הלב מהחוקרים לחקר סרטן השד2. יתר על כן, לתאים ראשוניים יש את היכולת לספק אפיון רלוונטי ביולוגית של תהליכים תאיים מורכבים בשל אגירתם של יציבות גנטית, מורפולוגיה נורמלית, ומערך שלם יותר של תפקודים תאיים בסיסיים שלא ניתן להשיג עם קווי תאים אימורטליים3. לפיכך, הבידו....

Protocol

רקמות חלב נורמליות טריות המשמשות בפרוטוקול זה נאספות מניתוח סביב הנגע של דלקת שד לובולרית גרנולומטית עקשנית בבית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית הסינית ג'ג'יאנג על פי הנחיות ועדת האתיקה הרפואית של בית החולים המסונף הראשון של האוניברסיטה הרפואית הסינית ג'ג'יאנג (פרוטוקול מס '. .......

Representative Results

איור 1 מציג סכמה של ההליך. הפרוטוקול כולל שימוש בשילוב של אנזימים, כלומר דיספאז, קולגנאז וטריפסין. שילוב זה מנוצל לצורך ניתוק יריעת האפיתל משכבת הפיברובלסטים שמתחתיה ולאחר מכן שימוש בטריפסין לניתוק תאי אפיתל החלב לתרחיף. בנוסף, הצמיחה של תאי אפיתל קודמה ביעילות על ידי הוספ?.......

Discussion

HMECs חיוניים לשמירה על השלמות האנטומית והתפקודית של רקמת החלב והם שימושיים בחקירות מדעיות, יישומים קליניים ותחומים קשורים15. תאי אפיתל ראשוניים הם סוג של תאים מיוחדים בעלי מעברים מוגבלים ותוחלת חיים קצרה יותר. עם זאת, הצמיחה של HMECs עוכבה על ידי אילוצים טכניים, אשר כתוצאה מכך עיכ?.......

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מתוכנית המדע והטכנולוגיה TCM של מחוז ג'ג'יאנג, סין (2017ZA055; 2018ZA036), ופרויקט המדע והטכנולוגיה של Zunyi, מחוז Guizhou, סין (Zunyi City Kehe Support NS (2020) No. 18) ל- X. Xu. המחברים מודים למעבדה לביולוגיה מולקולרית של חברת הטכנולוגיה הביו-רפואית Youjia (Hangzhou) על מתן הכשרה בתרביות תאים.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.05% TrypsinBasalmediaK431010For HMECs  dissociation
1.5 mL microcentrifuge TubesNEST081722CK01For cell digestion
100 µm mesh filterSolarbio431752For HMECs filtration
100 mm Cell Culture DishCorning430167For cell culture
4% paraformaldehydesolarbioP1110-100mlFor immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
50 mL Centrifuge TubeCorning430829For cell centrifugation
Cell StrainerSolarbio431752Cell filtration
CentrifugeEppendorf5404HN133048Cell centrifuge
CO2 IncubatorThermo Scientific42820906For cell incubation
Collagenase Type IMerckSKU:SCR103For HMECs isolation
Dispase SolarbioCAS:42613-33-2For HMECs isolation
DMEMGibco8122622Component of neutralization medium
Fetal Bovine SerumGibco2556132PComponent of neutralization medium
Penicillin/StreptomycinThermo Scientific15140-122Antibiotics
Phosphate buffered solutionTecono20201033Washing solution
rabbit anti CK7abcamab68459For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
rabbit anti GATA3abcamab199428For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
Y-27632SolarbioIY0040ROCK inhibitor

References

  1. Smolarz, B., Nowak, A. Z., Romanowicz, H. Breast cancer-epidemiology, classification, pathogenesis and treatment (review of literature). Cancers (Basel). 14 (10), 2569 (2022).
  2. Gudjonsson, T., Adriance, M. C., Sternlicht, M. D., Petersen, O. W., Bissell, M. J.

Explore More Articles

HMECHMECROCK

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved