Выделение и культивирование первичных эпителиальных клеток молочной железы человека

Summary

В настоящем исследовании сообщается о более простом, экономящем время и экономичном протоколе для эффективной изоляции и выращивания первичных эпителиальных клеток молочной железы человека (HMEC) из небольшого количества ткани молочной железы. Этот протокол подходит для быстрого производства первичных HMEC как для лабораторного, так и для клинического применения.

Abstract

Молочная железа является основной структурой молочной железы и играет важную роль в размножении. Эпителиальные клетки молочной железы человека (HMEC), которые являются исходными клетками рака молочной железы и других воспалительных заболеваний, связанных с молочной железой, привлекли значительное внимание. Тем не менее, выделение и культивирование первичных HMEC in vitro для исследовательских целей было сложной задачей из-за их высокодифференцированной, ороговевшей природы и короткого срока жизни. Таким образом, разработка простого и эффективного метода выделения и культивирования HMECs имеет большую научную ценность для изучения биологии молочной железы и заболеваний, связанных с молочной железой. В этом исследовании мы успешно выделили первичные HMECs из небольших количеств ткани молочной железы путем переваривания смесью ферментов в сочетании с исходной культурой в 5% сыворотке плода крупного рогатого скота DMEM, содержащей ингибитор Rho-ассоциированной киназы (ROCK) Y-27632, с последующим расширением культуры в бессывороточной кератиноцитарной среде. Этот подход избирательно способствует росту эпителиальных клеток, что приводит к оптимизированному выходу клеток. Простота и удобство этого метода делают его пригодным как для лабораторных, так и для клинических исследований, которые должны дать ценную информацию об этих важных областях исследований.

Introduction

Рак молочной железы является основным типом рака, диагностируемым у женщин во всем мире, и основной причиной смерти от рака¹. Патогенез рака молочной железы сложен и включает в себя множество факторов, таких как генетика, окружающая среда и образ жизни. HMECs, активные молочные клетки, являются одним из наиболее важных компонентов ткани молочной железы и, вероятно, являются исходными клетками, участвующими в канцерогенезе рака молочной железы. Таким образом, HMEC привлекли наибольшее внимание исследователей для изучения рака молочной железы². Кроме того, первичные клетки обладают способностью обеспечивать биологически зн....

Protocol

Свежие нормальные ткани молочной железы, используемые в этом протоколе, собираются в результате хирургического вмешательства вокруг очага рефрактерного гранулематозного лобулярного мастита в Первой аффилированной больнице Чжэцзянского китайского медицинского университета в соот?.......

Discussion

HMEC жизненно важны для сохранения анатомической и функциональной целостности ткани молочной железы, а также полезны в научных исследованиях, клинических реализациях и связанных с ними областях¹⁵. Первичные эпителиальные клетки — это тип специализированных клеток, которые.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.05% Trypsin	Basalmedia	K431010	For HMECs  dissociation
1.5 mL microcentrifuge Tubes	NEST	081722CK01	For cell digestion
100 µm mesh filter	Solarbio	431752	For HMECs filtration
100 mm Cell Culture Dish	Corning	430167	For cell culture
4% paraformaldehyde	solarbio	P1110-100ml	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
50 mL Centrifuge Tube	Corning	430829	For cell centrifugation
Cell Strainer	Solarbio	431752	Cell filtration
Centrifuge	Eppendorf	5404HN133048	Cell centrifuge
CO2 Incubator	Thermo Scientific	42820906	For cell incubation
Collagenase Type I	Merck	SKU:SCR103	For HMECs isolation
Dispase	Solarbio	CAS:42613-33-2	For HMECs isolation
DMEM	Gibco	8122622	Component of neutralization medium
Fetal Bovine Serum	Gibco	2556132P	Component of neutralization medium
Penicillin/Streptomycin	Thermo Scientific	15140-122	Antibiotics
Phosphate buffered solution	Tecono	20201033	Washing solution
rabbit anti CK7	abcam	ab68459	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
rabbit anti GATA3	abcam	ab199428	For immunofluorescence staining to check differentiation marker of HMECs
Y-27632	Solarbio	IY0040	ROCK inhibitor