A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
מוצג פרוטוקול לניתוח אוסטאוטומיה של עצם הירך עם שימוש בקיבוע לוחית פנימית באקסולוטלים בוגרים. ההליך יכול לשמש לביצוע מחקרים השוואתיים על התחדשות גפיים וריפוי שברים בדו-חיים ימיים.
האקסולוטל (Ambystoma mexicanum) הוא אורגניזם מודל מבטיח לרפואה רגנרטיבית בשל יכולתו יוצאת הדופן לחדש איברים שאבדו או ניזוקו, כולל גפיים, מוח, לב, זנב ועוד. מחקרים על אקסולוטל שופכים אור על מסלולים תאיים ומולקולריים השולטים בהפעלת אבות ושיקום רקמות לאחר פציעה. ידע זה יכול להיות מיושם כדי להקל על ריפוי של פציעות regeneration-incompetent, כגון עצם לא איחוד. בפרוטוקול הנוכחי מתואר ייצוב אוסטאוטומיה של עצם הירך באמצעות מערכת קיבוע לוחית פנימית. ההליך הותאם לשימוש בבעלי חיים ימיים (axolotl, Ambystoma mexicanum). נעשה שימוש באקסולוטלים של ≥20 ס"מ מקצה חוטם לזנב עם עצם הירך המקבילה בגודל עכבר מלא, ותשומת לב מיוחדת הוקדשה למיקום הצלחת וקיבועה, כמו גם לטיפול שלאחר הניתוח. טכניקה כירורגית זו מאפשרת קיבוע עצם סטנדרטי ומיוצב ויכולה להיות שימושית להשוואה ישירה להתחדשות גפיים אקסולוטליות ולמחקרים מקבילים של ריפוי עצם בקרב דו-חיים ויונקים.
האקסולוטל (Ambystoma mexicanum) הוא מודל חשוב להתחדשות איברים, כולל הזנב, חוט השדרה, המוח, הלב, הזימים והגפיים 1,2,3,4,5. מחקרים מפורטים של התחדשות גפיים אקסולוטליות חשפו מנגנונים של התמיינות תאים והיווצרות מאגר תאי גזע, בלסטמה, באתר הקטיעה. בשל יכולתם של תאי הבלסטמה לשחזר את כל חלקי הגפיים החסרים, כולל שלד בדוגמת 6,7, האקסולוטל נראה כאורגניזם מודל אטרקטיבי למחקרי ריפוי עצם. לאחרונה, מספר מחקרים התמקדו יותר....
ההליך הבא בוצע באישור שופט השלום בווינה (GZ: MA 58-65248-2021-26). בני 5-8 שנים, ≥ קצה חוטם לזנב בקוטר 20 ס"מ (חוטם עד קצה הזנב) אקסולוטלים ארוכים (Ambystoma mexicanum) שימשו לניתוחי שברים וקטיעות. גברים ונקבות כאחד שימשו לניתוחים. אקסולוטלים גודלו במכון המחקר לפתולוגיה מולקולרית. כאב וסיכו.......
ההליך הכירורגי המתואר כאן (איור 1) נמשך בין 20 דקות ל-30 דקות ודורש מנתח ועוזר. לחלופין, השתמש במיקרוסקופ דיסקציה דו-עינית או במערכת זכוכית מגדלת.
איור 1.......
השיטה המתוארת כיום של קיבוע לוחית הירך ואוסטאוטומיה מאפשרת את יישומה בבעלי חיים ימיים, כגון Ambystoma mexicanum (axolotl). שיטה כירורגית זו שימשה לאחרונה להשוואת ריפוי שברים והתחדשות גפיים באקסולוטלים לריפוי שברים בעכברים9. כמו בעכברים, ניתן לחבר לוחית קיבוע בעלת 4 .......
המחברים רוצים להודות לסבין סטומפ על התמיכה הטכנית המצוינת וללידיה גרוסר על הסיוע בניתוחים. מחקר זה מומן על ידי הקרן האוסטרית למדע [מלגת הרטה פירנברג מספר T-1219], ERC [מענק מתקדם, 742046 RegGeneMems], DFG [CRC 1444].
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.66 mm Gigly wire saw | RISystem | RIS.590.120 | |
7.0 Optilene suture | Braun | C3090538 | |
Benzocaine | Sigma-Aldrich | E1501 | dilute to 0.03% prior to using |
Butorphanol (Butomidor 10 mg/mL) | Richter Pharma AG | - | dilute to 0.5 mg/L prior to using |
Drill bit 0.30 mm | RISystem | RIS.590.200 | |
Dumont #5 Forceps - Standard/Inox | Fine Science Tools | 11251-20 | |
Hand drill | RISystem | RIS.390.130 | better to have at least 3 pieces |
Micro CT data analyzer | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan NRecon software | |
Micro CT specimen scanner | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan 1172 | |
Moria MC31b Iris forceps - smooth, curved, 10 cm | Fine Science Tools | 11373-12FST | 2 pieces |
MouseFix Drill-&Saw guide 1.75 mm, rigid | RISystem | RIS.301.102 | |
MouseFix plate 4 hole, rigid | RISystem | RIS.401.110 | |
MouseFix screw, L =2.00 mm | RISystem | RIS.401.100 | need 4 per bone |
Narrow Pattern Forceps | VWR | FSCI11002-12 | |
penicillin/streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
Ring forceps | Fine Science Tools | 11103-09 | |
scalpel #15 | B Braun, Thermo Fischer Scientific | 5518032 | |
Square box wrench 0.50 mm | RISystem | RIS.590.111 | |
Sterile bone wax, 2.5 g | Ethicon, Johnson & Johnson | W810 | |
Student Fine Scissors - Straight/11.5cm | Fine Science Tools | 91460-11 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved