Estabilização de uma osteotomia de fêmur com fixação de placa em Ambystoma mexicanum

Summary

Apresenta-se um protocolo para cirurgia de osteotomia femoral com o uso de fixação interna em axolotes maduros. O procedimento pode ser utilizado para realizar estudos comparativos sobre regeneração de membros e consolidação de fraturas em anfíbios aquáticos.

Abstract

O axolote (Ambystoma mexicanum) é um organismo modelo promissor para a medicina regenerativa devido à sua notável capacidade de regenerar órgãos perdidos ou danificados, incluindo membros, cérebro, coração, cauda e outros. Estudos sobre axolotes lançam luz sobre as vias celulares e moleculares que regem a ativação do progenitor e a restauração tecidual após a lesão. Esse conhecimento pode ser aplicado para facilitar a cicatrização de lesões incompetentes de regeneração, como a não consolidação óssea. No protocolo atual, a estabilização da osteotomia do fêmur usando um sistema de fixação de placa interna é descrita. O procedimento foi adaptado para uso em animais aquáticos (axolote , Ambystoma mexicanum). Foram utilizados axolotes de ≥20 cm focinho-cauda com fêmures comparáveis totalmente ossificados do tamanho de camundongos, e atenção especial foi dada ao posicionamento e fixação da placa, bem como aos cuidados pós-operatórios. Esta técnica cirúrgica permite a fixação óssea padronizada e estabilizada e pode ser útil para comparação direta com a regeneração de membros de axolotes e estudos análogos de cicatrização óssea em anfíbios e mamíferos.

Introduction

O axolote (Ambystoma mexicanum) é um modelo importante para a regeneração de órgãos, incluindo cauda, medula espinhal, cérebro, coração, brânquias e membros 1,2,3,4,5. Estudos detalhados da regeneração de membros de axolotes descobriram mecanismos de desdiferenciação celular e a formação de um pool de células-tronco, blastema, no local da amputação. Devido à capacidade das células do blastema de reconstruir todas as partes dos membros ausentes, incluindo um esquele....

Protocol

O seguinte procedimento foi realizado com a aprovação do Magistrado de Viena (GZ: MA 58-65248-2021-26). Axolotes longos (Ambystoma mexicanum) de 5 a 8 anos de idade, ≥ 20 cm focinho à ponta da cauda (focinho à ponta da cauda) foram usados para cirurgia de fratura e amputações. Tanto homens quanto mulheres foram usados para as cirurgias. Os axolotes foram criados nas instalações do Instituto de Pesquisa de Patologia Molecular. A dor e o risco de infecções foram contro.......

Discussion

O método atualmente descrito de fixação e osteotomia da placa do fêmur permite sua aplicação em animais aquáticos, como o Ambystoma mexicanum (axolote). Este método cirúrgico foi recentemente utilizado para comparar a consolidação de fraturas e regeneração de membros em axolotes com a consolidação de fraturas em camundongos⁹. Como nos camundongos, uma placa fixadora de 4 orifícios pode ser fixada ao osso com parafusos auto-quebráveis, e u.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.66 mm Gigly wire saw	RISystem	RIS.590.120
7.0 Optilene suture	Braun	C3090538
Benzocaine	Sigma-Aldrich	E1501	dilute to 0.03%  prior to using
Butorphanol (Butomidor 10 mg/mL)	Richter Pharma AG	-	dilute to 0.5 mg/L  prior to using
Drill bit 0.30 mm	RISystem	RIS.590.200
Dumont #5 Forceps - Standard/Inox	Fine Science Tools	11251-20
Hand drill	RISystem	RIS.390.130	better to have at least 3 pieces
Micro CT data analyzer	Bruker, Billerica, MA, USA	SkyScan NRecon software
Micro CT specimen scanner	Bruker, Billerica, MA, USA	SkyScan 1172
Moria MC31b Iris forceps - smooth, curved, 10 cm	Fine Science Tools	11373-12FST	2 pieces
MouseFix Drill-&Saw guide 1.75 mm, rigid	RISystem	RIS.301.102
MouseFix plate 4 hole, rigid	RISystem	RIS.401.110
MouseFix screw, L =2.00 mm	RISystem	RIS.401.100	need 4 per bone
Narrow Pattern Forceps	VWR	FSCI11002-12
penicillin/streptomycin	Gibco	15140-122
Ring forceps	Fine Science Tools	11103-09
scalpel #15	B Braun, Thermo Fischer Scientific	5518032
Square box wrench 0.50 mm	RISystem	RIS.590.111
Sterile bone wax, 2.5 g	Ethicon, Johnson & Johnson	W810
Student Fine Scissors - Straight/11.5cm	Fine Science Tools	91460-11