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Apresenta-se um protocolo para cirurgia de osteotomia femoral com o uso de fixação interna em axolotes maduros. O procedimento pode ser utilizado para realizar estudos comparativos sobre regeneração de membros e consolidação de fraturas em anfíbios aquáticos.
O axolote (Ambystoma mexicanum) é um organismo modelo promissor para a medicina regenerativa devido à sua notável capacidade de regenerar órgãos perdidos ou danificados, incluindo membros, cérebro, coração, cauda e outros. Estudos sobre axolotes lançam luz sobre as vias celulares e moleculares que regem a ativação do progenitor e a restauração tecidual após a lesão. Esse conhecimento pode ser aplicado para facilitar a cicatrização de lesões incompetentes de regeneração, como a não consolidação óssea. No protocolo atual, a estabilização da osteotomia do fêmur usando um sistema de fixação de placa interna é descrita. O procedimento foi adaptado para uso em animais aquáticos (axolote , Ambystoma mexicanum). Foram utilizados axolotes de ≥20 cm focinho-cauda com fêmures comparáveis totalmente ossificados do tamanho de camundongos, e atenção especial foi dada ao posicionamento e fixação da placa, bem como aos cuidados pós-operatórios. Esta técnica cirúrgica permite a fixação óssea padronizada e estabilizada e pode ser útil para comparação direta com a regeneração de membros de axolotes e estudos análogos de cicatrização óssea em anfíbios e mamíferos.
O axolote (Ambystoma mexicanum) é um modelo importante para a regeneração de órgãos, incluindo cauda, medula espinhal, cérebro, coração, brânquias e membros 1,2,3,4,5. Estudos detalhados da regeneração de membros de axolotes descobriram mecanismos de desdiferenciação celular e a formação de um pool de células-tronco, blastema, no local da amputação. Devido à capacidade das células do blastema de reconstruir todas as partes dos membros ausentes, incluindo um esquele....
O seguinte procedimento foi realizado com a aprovação do Magistrado de Viena (GZ: MA 58-65248-2021-26). Axolotes longos (Ambystoma mexicanum) de 5 a 8 anos de idade, ≥ 20 cm focinho à ponta da cauda (focinho à ponta da cauda) foram usados para cirurgia de fratura e amputações. Tanto homens quanto mulheres foram usados para as cirurgias. Os axolotes foram criados nas instalações do Instituto de Pesquisa de Patologia Molecular. A dor e o risco de infecções foram contro.......
O procedimento cirúrgico aqui descrito (Figura 1) dura entre 20 min e 30 min e requer um cirurgião e um assistente. Opcionalmente, use um microscópio de dissecção binocular ou sistema de lupa.
Figura 1: Esquemas do procedimento cirúrgico e da configuração expe.......
O método atualmente descrito de fixação e osteotomia da placa do fêmur permite sua aplicação em animais aquáticos, como o Ambystoma mexicanum (axolote). Este método cirúrgico foi recentemente utilizado para comparar a consolidação de fraturas e regeneração de membros em axolotes com a consolidação de fraturas em camundongos9. Como nos camundongos, uma placa fixadora de 4 orifícios pode ser fixada ao osso com parafusos auto-quebráveis, e u.......
Os autores gostariam de agradecer a Sabine Stumpp pelo excelente suporte técnico e a Lidia Grösser pela assistência nas cirurgias. Esta pesquisa foi financiada pelo Fundo Austríaco de Ciência [Hertha Firnberg Fellowship número T-1219], ERC [Advanced Grant, 742046 RegGeneMems], DFG [CRC 1444].
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.66 mm Gigly wire saw | RISystem | RIS.590.120 | |
7.0 Optilene suture | Braun | C3090538 | |
Benzocaine | Sigma-Aldrich | E1501 | dilute to 0.03% prior to using |
Butorphanol (Butomidor 10 mg/mL) | Richter Pharma AG | - | dilute to 0.5 mg/L prior to using |
Drill bit 0.30 mm | RISystem | RIS.590.200 | |
Dumont #5 Forceps - Standard/Inox | Fine Science Tools | 11251-20 | |
Hand drill | RISystem | RIS.390.130 | better to have at least 3 pieces |
Micro CT data analyzer | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan NRecon software | |
Micro CT specimen scanner | Bruker, Billerica, MA, USA | SkyScan 1172 | |
Moria MC31b Iris forceps - smooth, curved, 10 cm | Fine Science Tools | 11373-12FST | 2 pieces |
MouseFix Drill-&Saw guide 1.75 mm, rigid | RISystem | RIS.301.102 | |
MouseFix plate 4 hole, rigid | RISystem | RIS.401.110 | |
MouseFix screw, L =2.00 mm | RISystem | RIS.401.100 | need 4 per bone |
Narrow Pattern Forceps | VWR | FSCI11002-12 | |
penicillin/streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
Ring forceps | Fine Science Tools | 11103-09 | |
scalpel #15 | B Braun, Thermo Fischer Scientific | 5518032 | |
Square box wrench 0.50 mm | RISystem | RIS.590.111 | |
Sterile bone wax, 2.5 g | Ethicon, Johnson & Johnson | W810 | |
Student Fine Scissors - Straight/11.5cm | Fine Science Tools | 91460-11 |
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