Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Vários patógenos bacterianos podem causar infecções do trato respiratório e levar a sérios problemas de saúde se não forem detectados com precisão e tratados prontamente. A detecção rápida e precisa desses patógenos por meio de amplificação isotérmica mediada por loop fornece gerenciamento e controle eficazes de infecções do trato respiratório em ambientes clínicos.

Abstract

As infecções do trato respiratório (ITRs) estão entre os problemas mais comuns em ambientes clínicos. A identificação rápida e precisa de patógenos bacterianos fornecerá diretrizes práticas para o gerenciamento e tratamento de ITRs. Este estudo descreve um método para detectar rapidamente patógenos bacterianos que causam infecções do trato respiratório por meio de amplificação isotérmica mediada por loop multicanal (LAMP). O LAMP é uma ferramenta de diagnóstico sensível e específica que detecta rapidamente ácidos nucléicos bacterianos com alta precisão e confiabilidade. O método proposto oferece uma vantagem significativa sobre os métodos tradicionais de cultura bacteriana, que são demorados e muitas vezes requerem maior sensibilidade para detectar baixos níveis de ácidos nucléicos bacterianos. Este artigo apresenta resultados representativos da infecção por K. pneumoniae e suas múltiplas coinfecções usando LAMP para detectar amostras (escarro, lavado brônquico e lavado alveolar) do trato respiratório inferior. Em resumo, o método LAMP multicanal fornece um meio rápido e eficiente de identificar patógenos bacterianos únicos e múltiplos em amostras clínicas, o que pode ajudar a prevenir a disseminação de patógenos bacterianos e auxiliar no tratamento adequado de ITRs.

Introduction

As infecções do trato respiratório (ITRs) causadas por patógenos bacterianos contribuem principalmente para a morbidade e mortalidade em todo o mundo1. É definida como qualquer sintoma respiratório superior ou inferior acompanhado de febre com duração de 2-3 dias. Embora a infecção respiratória superior seja mais comum do que a infecção respiratória inferior, as infecções crônicas e recorrentes do trato respiratório também são condições clínicas comuns, apresentando grandes riscos aos indivíduos e sobrecarregando significativamente os sistemas de saúde2. Os patógenos bacterianos comuns de ITRs incluem Streptococcus p....

Protocol

Todas as amostras para este estudo foram avaliadas e aprovadas pelo Comitê de Revisão de Ética do Hospital Popular da Província de Guangdong (Número de aprovação: KY2023-1114-01). Todos os participantes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido antes dos experimentos. Os reagentes e equipamentos utilizados para o estudo estão listados na Tabela de Materiais. As abreviaturas usadas no protocolo estão listadas na Tabela Suplementar 1.

Representative Results

Este experimento emprega tecnologia de amplificação isotérmica, conduzindo reações em um chip de disco microfluídico. A reação ocorre em um analisador de ácido nucleico de chip microfluídico, empregando um método de inserção de corante de fluorescência. A reação isotérmica é realizada a uma temperatura constante de 65 °C e a análise de fluorescência em tempo real é realizada simultaneamente. As amostras positivas sofrem amplificação sob a ação da polimerase com funcionalidade de deslocamento da .......

Discussion

As infecções do trato respiratório são infecções hospitalares prevalentes, impondo graves consequências aos pacientes e aumentando as taxas de mortalidade16. A identificação oportuna e precisa de patógenos potenciais seguidos de antibióticos eficazes é a chave para o sucesso do tratamento e a melhoria do prognóstico, principalmente devido às limitações inerentes aos métodos tradicionaisde cultura 17. Neste estudo, usamos um método baseado em LAMP para dete.......

Acknowledgements

Agradecemos muito o apoio financeiro fornecido pela Fundação de Pesquisa Básica e Aplicada de Guangdong (Concessão nº 2022A1515220023) e pela Fundação de Pesquisa para Talentos Avançados do Hospital Popular da Província de Guandong (Concessão nº. KY012023293).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Bath Incubator(MK2000-2)ALLSHENGProvide a constant temperature environment
Bronchial lavage fluid collector headTIANPINGHUACHANGSEDA 20172081375Collecting bronchoalveolar lavage fluid
Fiberoptic bronchoscopeOLYMPUSSEDA 20153062703A flexible bronchoscope equipped with a fiberoptic light source and camera, to visually examine the airways and structures within the lungs. Assist in collecting bronchoalveolar lavage
HR1500-figure-materials-735B2HaierSEDA 20183541642Biosafety cabinet
NAOHMACKLINS817977Liquefy viscous lower respiratory tract sample
Nucleic acid detection kit for respiratory tract pathogensCapitalbio TechnologySEDA 20173401346Testing for bacteria infection
Nucleic acid extraction reagentCapitalbio TechnologySEDA 20160034For DNA extraction
RTisochip-WCapitalbio TechnologySEDA 20193220539Loop-mediated Isothermal Amplification
THERMO ST16RThermo Fisher ScientificSEDA 20180585Centrifuge the residual liquid off the wall of the tube.
Vortex mixer VM-5005JOANLABFor mixing reagent

References

Explore More Articles

Palavras chave Detec o R pidaPat genos BacterianosInfec es do Trato Respirat rio InferiorMicrofluidic chipAmplifica o Isot rmica Mediada por LoopLAMPK PneumoniaeCo infec esAmostras Cl nicasInfec es do Trato Respirat rioITRs

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved