A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
כאן, אנו מפרטים גישה פשוטה של הדמיה חיה לכימות הרגישות של אורגנואידים גידוליים שמקורם במטופל לקרינה מייננת.
טיפול בקרינה (RT) הוא אחד מעמודי התווך של ניהול סרטן קליני מודרני. עם זאת, לא כל סוגי הסרטן רגישים באותה מידה לקרינה, לעתים קרובות (אך לא תמיד) בגלל הבדלים ביכולתם של תאים ממאירים לתקן נזק חמצוני לדנ"א כפי שנגרם על ידי קרניים מייננות. בדיקות קלונוגניות שימשו במשך עשרות שנים כדי להעריך את רגישותם של תאי סרטן בתרבית לקרינה מייננת, בעיקר משום שתאי סרטן מוקרנים מתים לעתים קרובות באופן מושהה שקשה לכמת בטכניקות ציטומטריה או מיקרוסקופיה בזרימה קצרת טווח. למרבה הצער, לא ניתן להשתמש בבדיקות קלונוגניות ככאלה עבור מודלים מורכבים יותר של גידולים, כגון אורגנואידים של גידולים שמקורם במטופל (PDTOs). אכן, הקרנת PDTO מבוסס לא בהכרח תבטל את גדילתם כיחידות רב-תאיות, אלא אם כן התא דמוי הגבעול שלהם יושמד לחלוטין. יתר על כן, הקרנת תרחיפים חד-תאיים שמקורם ב-PDTO עשויה שלא לשחזר כראוי את הרגישות של תאים ממאירים ל-RT בהקשר של PDTO מבוסס. כאן, אנו מפרטים התאמה של בדיקות קלונוגניות קונבנציונליות הכוללת חשיפה של PDTOs מבוססים לקרינה מייננת, ואחריה דיסוציאציה של תא יחיד, ציפוי מחדש בתנאי תרבית מתאימים והדמיה חיה. תאי גזע דמויי גזע שאינם מוקרנים (בקרה) שמקורם ב-PDTO מגדלים PDTO ביעילות ספציפית ל-PDTO, המושפעת לרעה מהקרנה באופן תלוי מינון. בתנאים אלה, ניתן לכמת את יעילות יצירת PDTO ואת קצב הצמיחה כמדד לרגישות רדיואקטיבית בתמונות בהילוך מהיר שנאספו עד שבקרת PDTO משיגה תפוסה מוגדרת מראש בחלל.
טיפול בקרינה חיצונית (RT) הוא אחד מעמודי התווך של האונקולוגיה המודרנית, המשקף לא רק פעילות אנטי-סרטנית בולטת הקשורה לספקטרום מוגדר היטב של תופעות לוואי הניתנות לניהול בדרך כלל1, אלא גם זמינות קלינית נרחבת במיוחד (רוב מרכזי הסרטן במדינות המפותחות מצוידים במאיצים ליניאריים מודרניים עבור קרן חיצונית RT)2. בהתאם לרעיון זה, RT משמש ברחבי העולם בהצלחה הן למטרות ריפוי, בדרך כלל בהקשר של מחלהבשלב מוקדם 3,4, והן ליישומים פליאטיביים, כדי להכיל סימפטומים (למשל, כאב) מגידולים גרורתיים5. עם זאת, לא כל הממאירויות רגישות....
הריאגנטים והציוד ששימשו במחקר מפורטים בטבלת החומרים.
1. תרבות אורגנואידים
הערה: TNBC#1 PDTOs הוקמו במעבדה שלנו בהתבסס על רקמת גידול שהוסרה בניתוח ממטופלת עם סרטן שד טריפל נגטיב (TNBC) שסיפקה הסכמה מדעת להשתתף בפרוטוקול ביו-בנקאות (.......
TNBC#1 PDTOs נחשפו למנת קרינה אחת של 0 (בקרות לא מוקרן), 2 Gy, 4 Gy, 6 Gy, 8 Gy או 10 Gy ביום 0. מיד לאחר מכן, PDTOs נותקו כדי לקבל תרחיף חד-תאי עבור כל תנאי ניסוי. תאים שמקורם ב-PDTO נזרעו לאחר מכן בלוחות של 48 בארות בתוך 66% כיפות מטריג'ל (50 מיקרוליטר כל אחת) שהושקעו במרכז הבארות, ב-3 העתקים טכניים לכל מ.......
במאמר זה אנו מתארים התאמה של בדיקות קלונוגניות קונבנציונליות הרותמות PDTO של סרטן השד והדמיה חיה כדי לכמת רגישות רדיואקטיבית ל-PDTO בהתבסס על (1) ההתמדה של תאים דמויי גזע יוצרי PTDO על הקרנת PDTO במבחנה, ו-(2) קצב הצמיחה של PDTOs שתאים אלה (עשויים) לייצר. צעדים קריטיים של פרוטוקול .......
אנו מודים לריימונד בריונס ו-Wen H. Shen (Weill Cornell Medical College, New York, NY, USA) על עזרתם בפיתוח פרוטוקול זה. עבודה זו נתמכה על ידי מענק קונסורציום טרנספורמטיבי לסרטן השד ממשרד ההגנה האמריקאי BCRP (#W81XWH2120034, PI: Formenti).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
40 µm mesh filter | Thomas Scientific | 1164H35 | |
B27 | Invitrogen | 17504-044 | |
Cellometer Auto T4 Bright Field Cell Counter | Nexcelom | ||
DMEM F/12 | Corning | 12634-010 | |
Epidermal Growth Factor hEGF | Peprotech | AF-100-15 | |
EVOS FL Digital Inverted Fluorescence Microscope | Thermo Fisher Scientific | 12-563-460 | |
FGF10 | Peprotech | 100-26 | |
FGF7 | Peprotech | 100-19 | |
GlutaMax | Invitrogen | 35050061 | |
Hepes | Invitrogen | 15630-080 | |
IncuCyte software 2021A | Sartorius | version: 2021A | |
Incucyte SX1 | Sartorius | model SX1 | |
Incucyte validated 48 well plate | Corning | 3548 | |
Matrigel | Discovery Labware | 354230 | |
nAc | Sigma Aldrich | A9165-5G | |
Nicotinamide | Sigma-Aldrich | N0636 | |
Noggin | Purchased from the Englander Institute for Precision Medicine, Weill Cornell, NY, USA | ||
Non-treated 6 well plate | Cellstar | 657 185 | |
NR (Heregulin) | Peprotech | 100-03 | |
p38 MAP inhibitor p38i SB202190 | Sigma Aldrich | S7067 | |
PBS | Corning | 21-040-CV | |
PenStrep | Invitrogen | 15140-122 | |
Primocin | Invivogen | ant-pm-1 | |
Rspondin Media | Purchased from the Englander Institute for Precision Medicine, Weill Cornell, NY, USA | ||
Small Animal Radiation Research Platform (SARRP) | Xstrahl Ltd | ||
TGFbeta Receptor Inhibitor A83-01 | Tocris | 2939 | |
Trypan blue Stain (0.4%) | Gibco | 15250-61 | |
TrypLE | Gibco | 112605-028 | |
Y-27632 (RhoKi) | Selleck | S1049 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved