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In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Questo protocollo descrive il campionamento di sangue e urine per misurare i livelli di progesterone/estradiolo e gonadotropina corionica per determinare la fase del ciclo ovarico. I livelli ormonali vengono utilizzati per prevedere e determinare i tempi dell'ovulazione e gli ormoni vengono iniettati per regolare il ciclo ovarico e la crescita degli ovociti.

Abstract

Gli uistitì comuni sono piccole scimmie del Nuovo Mondo. Poiché molti dei loro meccanismi biologici sono simili a quelli degli esseri umani, gli uistitì sono potenzialmente utili per la ricerca medica e di biologia umana in una vasta gamma di campi, come le neuroscienze, la medicina rigenerativa e lo sviluppo. Tuttavia, c'è una mancanza di letteratura che descriva i metodi per molti esperimenti e procedure di base. Qui vengono descritti metodi dettagliati per determinare i livelli di ormoni sessuali (progesterone, estradiolo e gonadotropina corionica) negli uistitì. La misurazione di questi ormoni consente di prevedere la fase del ciclo ovarico, che in genere è di 26-30 giorni negli uistitì; Una determinazione accurata è essenziale per il prelievo di ovociti/zigoti al momento giusto e per la preparazione delle femmine ospiti per la generazione di uistitì geneticamente modificati.

Inoltre, la misurazione dei livelli di ormoni sessuali è utile per gli studi di endocrinologia, etologia, sviluppo precoce e biologia riproduttiva. Questo protocollo fornisce una descrizione dettagliata dei metodi per il prelievo di sangue dalla vena femorale, la separazione del plasma per la misurazione ormonale, la misurazione dei livelli di gonadotropina corionica utilizzando urina e plasma, il ripristino del ciclo ovarico utilizzando iniezioni di un analogo della prostaglandina F2α per abbreviare e sincronizzare il ciclo e promuovere la crescita follicolare e l'ovulazione iniettando l'ormone follicolo-stimolante e la gonadotropina corionica. Utilizzando questi protocolli, è possibile determinare le fasi del ciclo ovarico per la raccolta tempestiva di ovociti/zigoti.

Introduction

L'uistitì comune (Callithrix jacchus) è una piccola scimmia del Nuovo Mondo con molte caratteristiche simili a quelle dell'uomo, e la durata del suo ciclo ovarico è di 26-30 giorni 1,2. Gli studi sullo sviluppo precoce e sulla generazione di uistitì geneticamente modificati richiedono il prelievo di ovociti e zigoti in fasi specifiche del ciclo ovarico. Pertanto, la determinazione accurata dello stadio è fondamentale e può essere stimata misurando i livelli ematici degli ormoni progesterone (P4) ed estradiolo (E2)2,3

Protocol

Tutti i metodi che coinvolgono gli uistitì utilizzano elevati standard etici e di benessere e sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso il National Center for Child Health and Development. Gli animali utilizzati qui erano alloggiati in un solo alloggio o in coppia (una femmina e un maschio) con 12 ore di luce al giorno.

1. Prelievo di sangue dalla vena femorale

  1. Preparare una siringa da .......

Representative Results

I dettagli relativi agli animali utilizzati in questo studio sono elencati nella Tabella 1.

Analisi anatomiche della vena femorale
Le analisi anatomiche della vena femorale sono state eseguite utilizzando un uistitì comune maschio di 2 anni (I 7713M) sottoposto a eutanasia. Le vene e le arterie femorali si trovano nel triangolo femorale. Il triangolo femorale si forma ai confini tra la parete addominale e i muscoli della c.......

Discussion

La localizzazione della vena è il passaggio più critico nella raccolta del sangue. Sulla base di osservazioni anatomiche, questo protocollo introduce l'area prossimale nel triangolo femorale come un sito facile per la raccolta del sangue negli uistitì. Utilizzando quest'area, è possibile eseguire facilmente il prelievo di sangue da una vena di grandi dimensioni. Tuttavia, anche utilizzando questo protocollo, a volte si verificano lesioni a un'arteria. Quando si ferisce un'arteria, si.......

Acknowledgements

Vorremmo ringraziare Chunshen Shen, Hiroko Akutsu, Fumiyo Sugiki, Yuuna Hashimoto, Hina Naritomi, Yuuki Sakamoto e Mikiko Horigome per il loro supporto nella creazione di questo protocollo e nella cura quotidiana degli uistitì; Takayuki Mineshige per i commenti sul manoscritto; Yukiko Abe e i membri del laboratorio Aiba per aver condiviso le tecniche di raccolta degli zigoti; CIEA per aver condiviso le informazioni sulle abitazioni e gli esperimenti degli uistitì che hanno coltivato in 40 anni. Questa ricerca è stata supportata da AMED, JST e KAKENHI nell'ambito delle sovvenzioni n. JP19gm6310010, JP20gm6310010, JP21gm6310010 e JP22gm....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AIA-360Tosoh Corporation0019945Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK DILUENT CONCENTRATETosoh Corporation0020956Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK SUBSTRATE SET IITosoh Corporation0020968Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK WASH CONCENTRATETosoh Corporation0020955Hormone measurement (P4/E2)
CMS-1CLEA JapanMarmoset food
EstrumateMSD Animal HealthPGF2alpha analog (cloprostenol)
Gonal-f Subcutaneous Injection 150Merck Biopharma Co., Ltd.FSH
Gonatropin for intramuscular injection 1000ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.872413hCG
Heparin sodium injection solution 5,000 units/5 mLMochida Pharmaceutical Co., Ltd.224122458Blood collection
Immunochromatographic Test Kit for Detection of Common Marmoset Chorionic Gonadotropin (Dual Checker)CLEA Japan, Inc.Determining CG level
Low-profile double-arm microscope illumination LPF-SDSHIOKAZE GIKENDesk lamp for blood collection
Marmoset blood collection restraint deviceJIC JapanJM-1006Blood collection
http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html
email: vi@jic-japan.jp
Metacam 0.05%Boehringer Ingelheim Animal Health Japan Co., Ltd.Hematoma treatment
Sample Cup, 3 mL, PS, for Tosoh 360 and AIA-600 II, 1000/BagGlobe Scientific110913Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2Tosoh Corporation0025224Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 CALIBRATOR SETTosoh Corporation0025324Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 SAMPLE DILUTING SOLUTIONTosoh Corporation0025524Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIIITosoh Corporation0025240Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII CALIBRATOR SETTosoh Corporation0025340Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII SAMPLE DILUTING SOLUTIONTosoh Corporation 0025540Hormone measurement (P4/E2)
Syringe with 25 G (0.50 x 25 mm) needleTERUMOSS-01T2525Blood collection
Tensolvet 5.000 I.E. gel.Dechra Pharmaceuticals14033492Hematoma treatment
TOSOH MULTI-CONTROL SETTosoh Corporation0015965Hormone measurement (P4/E2)

References

  1. Kholkute, S. D. Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus). Primates. 25 (1), 123-126 (1984).
  2. Harding, R. D., Hulme, M. J., Lunn, S. F., Henderson, C., Aitken, R. J.

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