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In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Este protocolo descreve amostras de sangue e urina para medir os níveis de progesterona/estradiol e gonadotrofina coriônica para determinar o estágio do ciclo ovariano. Os níveis hormonais são usados para prever e determinar o momento da ovulação e os hormônios são injetados para regular o ciclo ovariano e o crescimento do oócito.

Abstract

Os saguis comuns são pequenos macacos do Novo Mundo. Como muitos de seus mecanismos biológicos são semelhantes aos dos humanos, os saguis são potencialmente úteis para pesquisas médicas e de biologia humana em vários campos, como neurociência, medicina regenerativa e desenvolvimento. No entanto, há uma falta de literatura descrevendo métodos para muitos experimentos e procedimentos básicos. Aqui, são descritos métodos detalhados para determinar os níveis de hormônios sexuais (progesterona, estradiol e gonadotrofina coriônica) em saguis. A medição desses hormônios permite a previsão do estágio do ciclo ovariano, que normalmente é de 26 a 30 dias em saguis; A determinação precisa é essencial para a colheita de oócitos/zigotos no momento correto e para a preparação de fêmeas hospedeiras para a geração de saguis geneticamente modificados.

Além disso, a medição dos níveis de hormônios sexuais é útil para estudos de endocrinologia, etologia, desenvolvimento inicial e biologia reprodutiva. Este protocolo fornece uma descrição detalhada dos métodos de amostragem de sangue da veia femoral, separação de plasma para medição hormonal, medição dos níveis de gonadotrofina coriônica usando urina e plasma, redefinição do ciclo ovariano usando injeções de um análogo de prostaglandina F2α para encurtar e sincronizar o ciclo e promovendo o crescimento folicular e a ovulação injetando hormônio folículo-estimulante e gonadotrofina coriônica. Usando esses protocolos, os estágios do ciclo ovariano podem ser determinados para a coleta oportuna de oócitos/zigotos.

Introduction

O sagui comum (Callithrix jacchus) é um pequeno macaco do Novo Mundo com muitas características semelhantes às dos humanos, e a duração de seu ciclo ovariano é de 26 a 30 dias 1,2. Estudos sobre o desenvolvimento inicial e a geração de saguis geneticamente modificados requerem a colheita de oócitos e zigotos em estágios específicos do ciclo ovariano. Assim, a determinação precisa do estágio é crucial e pode ser estimada pela medição dos níveis sanguíneos dos hormônios progesterona (P4) e estradiol (E2)2,3. Ess....

Protocol

Todos os métodos envolvendo saguis utilizaram altos padrões éticos e de bem-estar e foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Centro Nacional de Saúde e Desenvolvimento Infantil. Os animais utilizados aqui foram alojados individualmente ou pareados (uma fêmea e um macho) com 12 h de luz por dia.

1. Amostragem de sangue da veia femoral

  1. Prepare uma seringa de 1 ml (o tipo curto é fácil de utiliza.......

Representative Results

Os detalhes relacionados aos animais utilizados neste estudo estão listados na Tabela 1.

Análise anatômica da veia femoral
As análises anatômicas da veia femoral foram realizadas em um sagui-comum macho de 2 anos de idade (I 7713M) submetido à eutanásia. As veias e artérias femorais estão localizadas no triângulo femoral. O triângulo femoral é formado nos limites entre a parede abdominal e os músculos da coxa (.......

Discussion

A localização da veia é a etapa mais crítica na coleta de sangue. Com base em observações anatômicas, este protocolo apresenta a área proximal no triângulo femoral como um local fácil para coleta de sangue em saguis. Usando esta área, a amostragem de sangue de uma veia grande pode ser facilmente realizada. No entanto, mesmo usando este protocolo, às vezes ocorre lesão em uma artéria. Ao lesionar uma artéria, sugere-se a interrupção completa do sangramento aplicando press.......

Acknowledgements

Gostaríamos de agradecer a Chunshen Shen, Hiroko Akutsu, Fumiyo Sugiki, Yuuna Hashimoto, Hina Naritomi, Yuuki Sakamoto e Mikiko Horigome por seu apoio no estabelecimento deste protocolo e no cuidado diário dos saguis; Takayuki Mineshige pelos comentários sobre o manuscrito; Yukiko Abe e os membros do laboratório Aiba por compartilhar técnicas de coleta de zigotos; CIEA por compartilhar as informações sobre o alojamento dos saguis e experimentos que eles cultivaram ao longo de 40 anos. Esta pesquisa foi apoiada pela AMED, JST e KAKENHI sob os subsídios nº JP19gm6310010, JP20gm6310010, JP21gm6310010 e JP22gm6310010 (AMED), JPMJPR228B (J....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
AIA-360Tosoh Corporation0019945Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK DILUENT CONCENTRATETosoh Corporation0020956Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK SUBSTRATE SET IITosoh Corporation0020968Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK WASH CONCENTRATETosoh Corporation0020955Hormone measurement (P4/E2)
CMS-1CLEA JapanMarmoset food
EstrumateMSD Animal HealthPGF2alpha analog (cloprostenol)
Gonal-f Subcutaneous Injection 150Merck Biopharma Co., Ltd.FSH
Gonatropin for intramuscular injection 1000ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.872413hCG
Heparin sodium injection solution 5,000 units/5 mLMochida Pharmaceutical Co., Ltd.224122458Blood collection
Immunochromatographic Test Kit for Detection of Common Marmoset Chorionic Gonadotropin (Dual Checker)CLEA Japan, Inc.Determining CG level
Low-profile double-arm microscope illumination LPF-SDSHIOKAZE GIKENDesk lamp for blood collection
Marmoset blood collection restraint deviceJIC JapanJM-1006Blood collection
http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html
email: vi@jic-japan.jp
Metacam 0.05%Boehringer Ingelheim Animal Health Japan Co., Ltd.Hematoma treatment
Sample Cup, 3 mL, PS, for Tosoh 360 and AIA-600 II, 1000/BagGlobe Scientific110913Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2Tosoh Corporation0025224Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 CALIBRATOR SETTosoh Corporation0025324Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 SAMPLE DILUTING SOLUTIONTosoh Corporation0025524Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIIITosoh Corporation0025240Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII CALIBRATOR SETTosoh Corporation0025340Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII SAMPLE DILUTING SOLUTIONTosoh Corporation 0025540Hormone measurement (P4/E2)
Syringe with 25 G (0.50 x 25 mm) needleTERUMOSS-01T2525Blood collection
Tensolvet 5.000 I.E. gel.Dechra Pharmaceuticals14033492Hematoma treatment
TOSOH MULTI-CONTROL SETTosoh Corporation0015965Hormone measurement (P4/E2)

References

  1. Kholkute, S. D. Plasma progesterone levels throughout the ovarian cycle of the common marmoset (Callithrix jacchus). Primates. 25 (1), 123-126 (1984).
  2. Harding, R. D., Hulme, M. J., Lunn, S. F., Henderson, C., Aitken, R. J.

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