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Este protocolo descreve amostras de sangue e urina para medir os níveis de progesterona/estradiol e gonadotrofina coriônica para determinar o estágio do ciclo ovariano. Os níveis hormonais são usados para prever e determinar o momento da ovulação e os hormônios são injetados para regular o ciclo ovariano e o crescimento do oócito.
Os saguis comuns são pequenos macacos do Novo Mundo. Como muitos de seus mecanismos biológicos são semelhantes aos dos humanos, os saguis são potencialmente úteis para pesquisas médicas e de biologia humana em vários campos, como neurociência, medicina regenerativa e desenvolvimento. No entanto, há uma falta de literatura descrevendo métodos para muitos experimentos e procedimentos básicos. Aqui, são descritos métodos detalhados para determinar os níveis de hormônios sexuais (progesterona, estradiol e gonadotrofina coriônica) em saguis. A medição desses hormônios permite a previsão do estágio do ciclo ovariano, que normalmente é de 26 a 30 dias em saguis; A determinação precisa é essencial para a colheita de oócitos/zigotos no momento correto e para a preparação de fêmeas hospedeiras para a geração de saguis geneticamente modificados.
Além disso, a medição dos níveis de hormônios sexuais é útil para estudos de endocrinologia, etologia, desenvolvimento inicial e biologia reprodutiva. Este protocolo fornece uma descrição detalhada dos métodos de amostragem de sangue da veia femoral, separação de plasma para medição hormonal, medição dos níveis de gonadotrofina coriônica usando urina e plasma, redefinição do ciclo ovariano usando injeções de um análogo de prostaglandina F2α para encurtar e sincronizar o ciclo e promovendo o crescimento folicular e a ovulação injetando hormônio folículo-estimulante e gonadotrofina coriônica. Usando esses protocolos, os estágios do ciclo ovariano podem ser determinados para a coleta oportuna de oócitos/zigotos.
O sagui comum (Callithrix jacchus) é um pequeno macaco do Novo Mundo com muitas características semelhantes às dos humanos, e a duração de seu ciclo ovariano é de 26 a 30 dias 1,2. Estudos sobre o desenvolvimento inicial e a geração de saguis geneticamente modificados requerem a colheita de oócitos e zigotos em estágios específicos do ciclo ovariano. Assim, a determinação precisa do estágio é crucial e pode ser estimada pela medição dos níveis sanguíneos dos hormônios progesterona (P4) e estradiol (E2)2,3. Ess....
Todos os métodos envolvendo saguis utilizaram altos padrões éticos e de bem-estar e foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais do Centro Nacional de Saúde e Desenvolvimento Infantil. Os animais utilizados aqui foram alojados individualmente ou pareados (uma fêmea e um macho) com 12 h de luz por dia.
1. Amostragem de sangue da veia femoral
Os detalhes relacionados aos animais utilizados neste estudo estão listados na Tabela 1.
Análise anatômica da veia femoral
As análises anatômicas da veia femoral foram realizadas em um sagui-comum macho de 2 anos de idade (I 7713M) submetido à eutanásia. As veias e artérias femorais estão localizadas no triângulo femoral. O triângulo femoral é formado nos limites entre a parede abdominal e os músculos da coxa (.......
A localização da veia é a etapa mais crítica na coleta de sangue. Com base em observações anatômicas, este protocolo apresenta a área proximal no triângulo femoral como um local fácil para coleta de sangue em saguis. Usando esta área, a amostragem de sangue de uma veia grande pode ser facilmente realizada. No entanto, mesmo usando este protocolo, às vezes ocorre lesão em uma artéria. Ao lesionar uma artéria, sugere-se a interrupção completa do sangramento aplicando press.......
Gostaríamos de agradecer a Chunshen Shen, Hiroko Akutsu, Fumiyo Sugiki, Yuuna Hashimoto, Hina Naritomi, Yuuki Sakamoto e Mikiko Horigome por seu apoio no estabelecimento deste protocolo e no cuidado diário dos saguis; Takayuki Mineshige pelos comentários sobre o manuscrito; Yukiko Abe e os membros do laboratório Aiba por compartilhar técnicas de coleta de zigotos; CIEA por compartilhar as informações sobre o alojamento dos saguis e experimentos que eles cultivaram ao longo de 40 anos. Esta pesquisa foi apoiada pela AMED, JST e KAKENHI sob os subsídios nº JP19gm6310010, JP20gm6310010, JP21gm6310010 e JP22gm6310010 (AMED), JPMJPR228B (J....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
AIA-360 | Tosoh Corporation | 0019945 | Hormone measurement (P4/E2) |
AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE | Tosoh Corporation | 0020956 | Hormone measurement (P4/E2) |
AIA-PACK SUBSTRATE SET II | Tosoh Corporation | 0020968 | Hormone measurement (P4/E2) |
AIA-PACK WASH CONCENTRATE | Tosoh Corporation | 0020955 | Hormone measurement (P4/E2) |
CMS-1 | CLEA Japan | Marmoset food | |
Estrumate | MSD Animal Health | PGF2alpha analog (cloprostenol) | |
Gonal-f Subcutaneous Injection 150 | Merck Biopharma Co., Ltd. | FSH | |
Gonatropin for intramuscular injection 1000 | ASKA Pharmaceutical Co., Ltd. | 872413 | hCG |
Heparin sodium injection solution 5,000 units/5 mL | Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. | 224122458 | Blood collection |
Immunochromatographic Test Kit for Detection of Common Marmoset Chorionic Gonadotropin (Dual Checker) | CLEA Japan, Inc. | Determining CG level | |
Low-profile double-arm microscope illumination LPF-SD | SHIOKAZE GIKEN | Desk lamp for blood collection | |
Marmoset blood collection restraint device | JIC Japan | JM-1006 | Blood collection http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html email: vi@jic-japan.jp |
Metacam 0.05% | Boehringer Ingelheim Animal Health Japan Co., Ltd. | Hematoma treatment | |
Sample Cup, 3 mL, PS, for Tosoh 360 and AIA-600 II, 1000/Bag | Globe Scientific | 110913 | Hormone measurement (P4/E2) |
ST AIA-PACK iE2 | Tosoh Corporation | 0025224 | Hormone measurement (P4/E2) |
ST AIA-PACK iE2 CALIBRATOR SET | Tosoh Corporation | 0025324 | Hormone measurement (P4/E2) |
ST AIA-PACK iE2 SAMPLE DILUTING SOLUTION | Tosoh Corporation | 0025524 | Hormone measurement (P4/E2) |
ST AIA-PACK PROGIII | Tosoh Corporation | 0025240 | Hormone measurement (P4/E2) |
ST AIA-PACK PROGIII CALIBRATOR SET | Tosoh Corporation | 0025340 | Hormone measurement (P4/E2) |
ST AIA-PACK PROGIII SAMPLE DILUTING SOLUTION | Tosoh Corporation | 0025540 | Hormone measurement (P4/E2) |
Syringe with 25 G (0.50 x 25 mm) needle | TERUMO | SS-01T2525 | Blood collection |
Tensolvet 5.000 I.E. gel. | Dechra Pharmaceuticals | 14033492 | Hematoma treatment |
TOSOH MULTI-CONTROL SET | Tosoh Corporation | 0015965 | Hormone measurement (P4/E2) |
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