Забор крови и измерение гормонов для определения стадии овариального цикла у мартышек

Summary

Этот протокол описывает забор крови и мочи для измерения уровней прогестерона/эстрадиола и хорионического гонадотропина для определения стадии овариального цикла. Уровни гормонов используются для прогнозирования и определения сроков овуляции, а гормоны вводятся для регулирования овариального цикла и роста ооцитов.

Abstract

Обыкновенные мартышки – это маленькие обезьяны Нового Света. Поскольку многие из их биологических механизмов схожи с человеческими, мартышки потенциально полезны для медицинских и биологических исследований в различных областях, таких как нейробиология, регенеративная медицина и развитие. Тем не менее, существует нехватка литературы, описывающей методы многих основных экспериментов и процедур. Здесь подробно описаны методы определения уровня половых гормонов (прогестерона, эстрадиола и хорионического гонадотропина) у игрунок. Измерение этих гормонов позволяет предсказать стадию овариального цикла, которая обычно составляет 26-30 дней у мартышек; Точное определение имеет важное значение для сбора ооцитов/зигот в правильный момент времени и для подготовки самок-хозяев к созданию генетически модифицированных игрунок.

Кроме того, измерение уровня половых гормонов полезно для эндокринологии, этологии, раннего развития и исследований репродуктивной биологии. В этом протоколе подробно описаны методы забора крови из бедренной вены, разделения плазмы для измерения гормонов, измерения уровня хорионического гонадотропина с помощью мочи и плазмы, сброса овариального цикла с помощью инъекций аналога простагландина F2α для укорачивания и синхронизации цикла, а также стимулирования роста фолликулов и овуляции путем инъекции фолликулостимулирующего гормона и хорионического гонадотропина. Используя эти протоколы, можно определить стадии яичникового цикла для своевременного сбора ооцитов/зигот.

Introduction

Обыкновенная мартышка (Callithrix jacchus) - маленькая обезьяна Нового Света со многими характеристиками, схожими с человеческими, а продолжительность ее овариального цикла составляет 26-30 дней ^1,2. Исследования раннего развития и создания генетически модифицированных игрунок требуют сбора ооцитов и зигот на определенных этапах овариального цикла. Таким образом, точное определение стадии имеет решающее значение и может быть оценено путем измерения уровня гормонов прогестерона (P4) и эстрадиола (E2^{) в крови.} Э....

Protocol

Все методы с участием мартышек соответствовали высоким этическим стандартам и стандартам благополучия и были одобрены Комитетом по уходу за животными и их использованию в Национальном центре детского здоровья и развития. Животные, используемые здесь, были однокомн?.......

Discussion

Определение местоположения вены является наиболее важным этапом сбора крови. Основываясь на анатомических наблюдениях, этот протокол вводит проксимальную область в бедренном треугольнике как легкое место для сбора крови у мартышек. Используя эту область, можно лег?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
AIA-360	Tosoh Corporation	0019945	Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK DILUENT CONCENTRATE	Tosoh Corporation	0020956	Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK SUBSTRATE SET II	Tosoh Corporation	0020968	Hormone measurement (P4/E2)
AIA-PACK WASH CONCENTRATE	Tosoh Corporation	0020955	Hormone measurement (P4/E2)
CMS-1	CLEA Japan		Marmoset food
Estrumate	MSD Animal Health		PGF2alpha analog (cloprostenol)
Gonal-f Subcutaneous Injection 150	Merck Biopharma Co., Ltd.		FSH
Gonatropin for intramuscular injection 1000	ASKA Pharmaceutical Co., Ltd.	872413	hCG
Heparin sodium injection solution 5,000 units/5 mL	Mochida Pharmaceutical Co., Ltd.	224122458	Blood collection
Immunochromatographic Test Kit for Detection of Common Marmoset Chorionic Gonadotropin (Dual Checker)	CLEA Japan, Inc.		Determining CG level
Low-profile double-arm microscope illumination LPF-SD	SHIOKAZE GIKEN		Desk lamp for blood collection
Marmoset blood collection restraint device	JIC Japan	JM-1006	Blood collection http://www.jic-japan.jp/prd/marmoset/prd016.html email: vi@jic-japan.jp
Metacam 0.05%	Boehringer Ingelheim Animal Health Japan Co., Ltd.		Hematoma treatment
Sample Cup, 3 mL, PS, for Tosoh 360 and AIA-600 II, 1000/Bag	Globe Scientific	110913	Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2	Tosoh Corporation	0025224	Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 CALIBRATOR SET	Tosoh Corporation	0025324	Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK iE2 SAMPLE DILUTING SOLUTION	Tosoh Corporation	0025524	Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII	Tosoh Corporation	0025240	Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII CALIBRATOR SET	Tosoh Corporation	0025340	Hormone measurement (P4/E2)
ST AIA-PACK PROGIII SAMPLE DILUTING SOLUTION	Tosoh Corporation	0025540	Hormone measurement (P4/E2)
Syringe with 25 G (0.50 x 25 mm) needle	TERUMO	SS-01T2525	Blood collection
Tensolvet 5.000 I.E. gel.	Dechra Pharmaceuticals	14033492	Hematoma treatment
TOSOH MULTI-CONTROL SET	Tosoh Corporation	0015965	Hormone measurement (P4/E2)