लाइव प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर मानव कोलोनिक organoids में साइटोकिन प्रेरित कोशिका मौत की मात्रा का ठहराव

अल्सरेटिव कोलाइटिस (यूसी) और क्रोहन रोग (सीडी) जैसे सूजन आंत्र रोगों (आईबीडी) वाले रोगियों में आंतों के उपकला कोशिका (आईईसी) की मृत्यु बढ़ जाती है। यह आंतों के अवरोध समारोह में दोष, सूजन का तेज होना, और रोग इम्यूनोपैथोजेनेसिस में योगदान कर सकता है। आईईसी मौत में इस वृद्धि के लिए साइटोकिन्स और डेथ रिसेप्टर लिगेंड आंशिक रूप से जिम्मेदार हैं। आईबीडी-प्रासंगिक साइटोकिन्स, जैसे टीएनएफ-α और आईएफएन-γ, स्वतंत्र रूप से और संयोजन में आईईसी के लिए साइटोटोक्सिक हैं। यह प्रोटोकॉल एक फ्लोरोसेंट सेल डेथ डाई (SYTOX ग्रीन न्यूक्लिक एसिड स्टेन), लाइव प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी, और ओपन-सोर्स छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके सीडी रोगी-व्युत्पन्न कॉलोनिक ऑर्गेनोइड में साइटोकाइन प्रेरित साइटोटॉक्सिसिटी की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक सरल और व्यावहारिक परख का वर्णन करता है। हम यह भी प्रदर्शित करते हैं कि ऑर्गेनॉइड साइटोटॉक्सिसिटी के आधार पर पेर्टुरबैगन इंटरैक्शन (सीपीआई) के गुणांक की गणना करने के लिए ब्लिस इंडिपेंडेंस गणितीय मॉडल का उपयोग कैसे करें। सीपीआई का उपयोग यह निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है कि साइटोकिन संयोजनों या अन्य प्रकार के गड़बड़ी के बीच बातचीत विरोधी, योजक या सहक्रियात्मक है या नहीं। इस प्रोटोकॉल को रोगी-व्युत्पन्न कॉलोनिक ऑर्गेनोइड का उपयोग करके साइटोकिन्स और अन्य perturbagens की साइटोटोक्सिक गतिविधि की जांच के लिए लागू किया जा सकता है।