Isolering av mitokondrier för mitokondriell superkomplex analys från små vävnads- och cellodlingsprover.

Under de senaste decennierna har de bevis som samlats in om existensen av respiratoriska superkomplex (SC) förändrat vår förståelse av den mitokondriella elektrontransportkedjans organisation, vilket ger upphov till förslaget om "plasticitetsmodellen". Denna modell postulerar samexistensen av olika proportioner av SC och komplex beroende på vävnaden eller den cellulära metaboliska statusen. Den dynamiska karaktären hos sammansättningen i SC skulle göra det möjligt för celler att optimera användningen av tillgängliga bränslen och effektiviteten i elektronöverföringen, minimera genereringen av reaktiva syreradikaler och gynna cellernas förmåga att anpassa sig till miljöförändringar.

På senare tid har abnormiteter i SC-sammansättningen rapporterats vid olika sjukdomar såsom neurodegenerativa sjukdomar (Alzheimers och Parkinsons sjukdom), Barths syndrom, Leighs syndrom eller cancer. Betydelsen av förändringar i SC-sammansättningen i sjukdomsprogressionen behöver fortfarande inte bekräftas. Ändå är det ofta en utmaning att ha tillgång till tillräckligt många prover för att fastställa SC-monteringsstatusen. Detta händer med biopsier eller vävnadsprover som är små eller måste delas för flera analyser, med cellkulturer som har långsam tillväxt eller kommer från mikrofluidiska enheter, med vissa primära kulturer eller sällsynta celler, eller när effekten av särskilda kostsamma behandlingar måste analyseras (med nanopartiklar, mycket dyra föreningar, etc.). I dessa fall krävs en effektiv och lättanvänd metod. Denna artikel presenterar en metod anpassad för att erhålla berikade mitokondriella fraktioner från små mängder celler eller vävnader för att analysera strukturen och funktionen hos mitokondriella SCs genom nativt elektrofores följt av in-gel aktivitetsanalyser eller western blot.