Modellazione in vitro della deposizione di grasso nella malattia epatica steatosica associata a disfunzione metabolica

Riepilogo

Questo articolo descrive l'uso di cellule HepG2 indotte da acido oleico come modello per la malattia steatosica epatica associata a disfunzione metabolica.

Abstract

La prevalenza della malattia steatosica epatica associata a disfunzione metabolica (MASLD) è aumentata a causa dei cambiamenti nei modelli economici e di stile di vita, portando a significative sfide per la salute. Rapporti precedenti hanno studiato la creazione di modelli animali e cellulari per MASLD, evidenziando le differenze tra di loro. In questo studio, è stato creato un modello cellulare inducendo l'accumulo di grasso in MASLD. Le cellule HepG2 sono state stimolate con l'acido grasso insaturo acido oleico a varie concentrazioni (0,125 mM, 0,25 mM, 0,5 mM, 1 mM) per emulare la MASLD. L'efficacia del modello è stata valutata utilizzando i saggi del kit di conteggio cellulare-8, la colorazione Oil Red O e l'analisi del contenuto lipidico. Questo studio mirava a creare un modello cellulare semplice da usare per le cellule MASLD. I risultati dei saggi del kit di conteggio delle cellule-8 hanno mostrato che la sopravvivenza delle cellule HepG2 dipendeva dalla concentrazione di acido oleico, con un GI₅₀ di 1,875 mM. La vitalità cellulare nei gruppi 0,5 mM e 1 mM era significativamente inferiore rispetto a quella del gruppo di controllo (P < 0,05). Inoltre, la colorazione con olio rosso O e l'analisi del contenuto lipidico hanno esaminato la deposizione di grasso a concentrazioni variabili di acido oleico (0,125 mM, 0,25 mM, 0,5 mM, 1 mM) su cellule HepG2. Il contenuto lipidico dei gruppi 0,25 mM, 0,5 mM e 1 mM era significativamente superiore a quello del gruppo di controllo (P < 0,05). Inoltre, i livelli di trigliceridi nei gruppi OA erano significativamente più alti di quelli nel gruppo di controllo (P < 0,05).

Introduzione

La malattia steatosica epatica associata a disfunzione metabolica (MASLD) comprende una serie di condizioni, tra cui la steatosi semplice, la steatoepatite non alcolica (NASH), la cirrosi e il carcinoma epatocellulare ^1,2,3,4,5,6, tutti attribuiti a fattori diversi dal consumo di alcol⁷. La MASLD è la malattia epatica più diffusa causata da danno epatico metabolico, che colpisce quasi un quarto della popolazione globale^<....

Protocollo

NOTA: Consultare la Tabella dei materiali per i dettagli relativi a tutti i materiali, gli strumenti e i reagenti utilizzati in questo protocollo.

1. Coltura cellulare

1. Colture di cellule HepG2 in fiasche di coltura contenenti Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) (contenenti il 10% di siero fetale bovino [FBS], 100 unità/mL di penicillina e 100 μg/mL di streptomicina). Mantenere i matracci di coltura a 37 °C in un incubatore al 5% di CO₂ .

2. Effetto dell'acido oleico sulla vitalità cellulare misurato dal kit per il conteggio delle cellule-8

Risultati

Effetto dell'acido oleico sulla vitalità cellulare
Le cellule HepG2 sono state esposte a concentrazioni variabili di OA (0 mM, 0,125 mM, 0,25 mM, 0,5 mM, 1 mM), con conseguente diminuzione dei tassi di sopravvivenza cellulare a 0,125 mM, 0,25 mM, 0,5 mM e 1 mM rispetto a 0 mM. La significatività statistica è stata osservata a 0,5 mM (P < 0,05) e 1 mM (P < 0,05) rispetto a 0 mM. I risultati dell'impatto dell'OA sulla vitalità cellulare, valutati dal kit CCK-8, sono mostrati nella<.......

Discussione

La MASLD è una sindrome clinicopatologica caratterizzata da un'eccessiva deposizione di grasso intracellulare negli epatociti dovuta a fattori diversi dall'alcol e da altri agenti dannosi per il fegato¹⁸. La MASLD è strettamente legata al danno epatico da stress metabolico acquisito, in particolare associato all'insulino-resistenza e alla suscettibilità genetica. Per studiare e selezionare efficacemente i farmaci per la MASLD, è fondamentale selezionare un modello sperimentale appropriato. La .......

Materiali

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.22 µm filter	Millex
0.25% Trypsin-EDTA (1x) Trypsin-EDTA	Gibco	25200-056
0.45 µm filter	Millex
2 mL Crygenic Vials	CORNING	430659
25 cm2 Cell Culture Flask	CORNING	430639
6-well cell culture plate	CORNING	3516
96-well cell culture plate	CORNING	3599
Blood Count Plate	Shanghai Jing Jing Biochemical Reagent & Instrument Co.	02270113
Cell Counting Kit-8 assays	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	CA1210-1000T
CO2 incubator	NUAIRE	NU-5710E
DMSO Dimethyl sulfoxide	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	D8371
Dulbecco's Modified Eagle Medium	Gibco	8122691
Enzyme Labeling Equipment	Tecan	Spark
Fetal Bovine Serum, Qualified	Gibco	10099141
HepG2 cells line	Beijing North China Chuanglian Biotechnology Research Institute (BNCC)	221031
Human Triglyceride (TG) ELISA instruction	Nanjing Jiacheng Bioengineering Institute	20170301
Inverted Microscope for Cell Culture	Leica	DMi1
Isopropanol	Tianjin Zhiyuan Chemical Reagent Co.	2021030141
Oil Red Stain Kit, For Cultured Cells	Beijing Solarbio Science & Technology Co.,Ltd.	G1262
Oleic acid	Sangon Biotech (Shanghai) Co., Ltd.	A502071
Penicillin Streptomycin	Gibco	15140122
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