Modificando os níveis de ácido fólico ou colina na dieta materna para estudar o impacto das deficiências nos resultados de saúde da prole

Summary

Este protocolo descreve o método para reduzir a ingestão dietética de ácido fólico ou colina em camundongos fêmeas antes da gravidez com o objetivo de investigar o impacto da dieta materna nos resultados de saúde da prole.

Abstract

A nutrição materna durante a gravidez e lactação desempenha um papel importante no neurodesenvolvimento da prole. O metabolismo de um carbono (1C), que gira em torno do ácido fólico e da colina, bem como de outras vitaminas do complexo B, desempenha um papel fundamental durante o fechamento do tubo neural do feto em desenvolvimento. No entanto, o impacto dessas deficiências nutricionais maternas durante a gravidez nos resultados de saúde da prole após o nascimento permanece relativamente indefinido. Além disso, as deficiências dietéticas maternas em ácido fólico ou colina podem afetar outros resultados de saúde na prole - tornando este um modelo valioso. Este protocolo tem como objetivo delinear o procedimento para induzir uma deficiência no metabolismo de 1C em camundongos fêmeas por meio de modificações na dieta. As fêmeas são colocadas em dietas no desmame, até 2 meses de idade, por 4-6 semanas antes do acasalamento e permanecem na dieta durante a gravidez e lactação. Os descendentes dessas fêmeas podem ser avaliados quanto a resultados de saúde. As fêmeas podem ser usadas várias vezes para gerar descendentes, e os tecidos das fêmeas podem ser coletados para medir as medições de metabólitos 1C. Este protocolo fornece uma visão geral de como induzir deficiências dietéticas maternas em ácido fólico ou colina para estudar os resultados de saúde da prole.

Introduction

A nutrição materna durante a gravidez e lactação desempenha um papel vital no desenvolvimento da prole. O metabolismo de um carbono (1C) é uma rede metabólica chave que integra sinais nutricionais com biossíntese, homeostase redox e epigenética. O ácido fólico e a colina são componentes centrais do 1C que desempenham um papel importante no fechamento do tubo neural. É amplamente recomendado para as mulheres suplementarem com ácido fólico e colina durante a idade fértil¹. Embora o papel crítico do ácido fólico no desenvolvimento fetal esteja claramente estabelecido, os mecanismos subjacentes envolvidos permanecem obscuros. Recomenda-se que as mu....

Protocol

Este protocolo foi aprovado e todos os animais foram utilizados de acordo com as diretrizes do Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade do Meio-Oeste (Protocolo 2983). Camundongos C57BL / 6J fêmeas, 2 meses de idade (peso corporal, ~ 20 g), foram usados neste estudo. Em geral, camundongos fêmeas em idade reprodutiva podem ser usados¹⁰. Para garantir que os efeitos da ninhada sejam evitados, várias fêmeas precisam ser usadas para cada dieta¹¹. O.......

Discussion

Durante a implementação deste protocolo em laboratórios de pesquisa, existem várias notas importantes que os pesquisadores precisam considerar antes de iniciar os experimentos. Em primeiro lugar, na fabricação de dietas, é necessário tempo suficiente para fabricar a dieta antes do início do estudo experimental. Os prazos de entrega podem variar de empresa para empresa, e o envio de dieta também precisa ser levado em consideração. Camundongos fêmeas que estão em idade reprodutiva (~ 2-2,5 meses de idade) pod.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL tubes	Eppendorf
C57BL/6 Female Mice	Charles River	27	Mice can be bred in house as well.
Choline Deficient Diet	Envigo	TD.06119
Control Diet	Envigo	TD.190790
EDTA tubes
Folic Acid Deficient Diet	Envigo	TD.01546
GraphPad prism			https://www.graphpad.com/features
Housing for rodents	Lab Products, LLC	One CageVentilated Racks & Cages
Liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS)	SCIEX, Framingham, MA	5500 QTrap
Ultra-performance liquid chromatography (UPLC)	Shimadzu, Columbia, MD, USA	Nexera