A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Abstract
Biology
موت الخلايا هو عملية أساسية في جميع الكائنات الحية. ينشئ البروتوكول عديد السكاريد الشحمي (LPS) والأدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP) الناجم عن ترسب الدهون المتمايز فوربول -12-ميريستات -13-أسيتات (PMA) في نموذج البلاعم البشرية (THP-1) لمراقبة موت الخلايا. LPS جنبا إلى جنب مع ATP هي طريقة تحريض التهابية كلاسيكية ، وغالبا ما تستخدم لدراسة pyroptosis ، ولكن موت الخلايا المبرمج و necroptosis تستجيب أيضا للتحفيز بواسطة LPS / ATP. في ظل الظروف العادية ، يتم توطين فوسفاتيديل سيرين فقط في النشرة الداخلية لغشاء البلازما. ومع ذلك ، في المراحل المبكرة من pyroptosis ، موت الخلايا المبرمج ، و necroptosis ، يظل غشاء الخلية سليما ويتعرض للفوسفاتيديل سيرين ، وفي المراحل اللاحقة ، يفقد غشاء الخلية سلامته. هنا ، تم استخدام قياس التدفق الخلوي لتحليل تلطيخ Annexin V و 7-Aminoactinomycin D (AAD) للكشف عن موت الخلايا من الخلايا بأكملها. تظهر النتائج أن الخلايا الكبيرة ماتت بعد التحفيز باستخدام LPS / ATP. باستخدام المجهر الإلكتروني الماسح ، نلاحظ الأشكال المحتملة لموت الخلايا في الخلايا الفردية. تشير النتائج إلى أن الخلايا قد تخضع لداء البروبتيس أو موت الخلايا المبرمج أو التنخر بعد التحفيز باستخدام LPS / ATP. يركز هذا البروتوكول على مراقبة موت الضامة بعد التحفيز باستخدام LPS / ATP. أظهرت النتائج أن موت الخلايا بعد تحفيز LPS و ATP لا يقتصر على pyroptosis وأن موت الخلايا المبرمج وموت الخلايا المبرمج الناخر يمكن أن يحدث أيضا ، مما يساعد الباحثين على فهم موت الخلايا بشكل أفضل بعد تحفيز LPS و ATP واختيار طريقة تجريبية أفضل.
Explore More Videos
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved