LPS og ATP-induceret død af PMA-differentierede THP-1-makrofager og dens validering

Celledød er en grundlæggende proces i alle levende organismer. Protokollen etablerer et lipopolysaccharid (LPS) og adenosintrifosfat (ATP)-induceret phorbol-12-myristate-13-acetat (PMA)-differentieret lipidaflejring i human monocyt (THP-1) makrofagmodel for at observere celledød. LPS kombineret med ATP er en klassisk inflammatorisk induktionsmetode, der ofte bruges til at studere pyroptose, men apoptose og nekrotose reagerer også på stimulering af LPS/ATP. Under normale omstændigheder er phosphatidylserin kun lokaliseret i den indre folder af plasmamembranen. I de tidlige stadier af pyroptose, apoptose og nekrotose forbliver cellemembranen imidlertid intakt og udsat for fosfatidylserin, og i de senere stadier mister cellemembranen sin integritet. Her blev flowcytometri brugt til at analysere Annexin V og 7-Aminoactinomycin D (AAD) dobbeltfarvning for at påvise celledøden fra hele cellerne. Resultaterne viser, at betydelige celler døde efter stimulering med LPS/ATP. Ved hjælp af scanningselektronmikroskopi observerer vi de mulige former for celledød i individuelle celler. Resultaterne indikerer, at celler kan gennemgå pyroptose, apoptose eller nekrotose efter stimulering med LPS/ATP. Denne protokol fokuserer på at observere makrofagers død efter stimulering med LPS/ATP. Resultaterne viste, at celledød efter LPS- og ATP-stimulering ikke er begrænset til pyroptose, og at apoptose og nekrotisk apoptose også kan forekomme, hvilket hjælper forskere med bedre at forstå celledød efter LPS- og ATP-stimulering og vælge en bedre eksperimentel metode.