LPS- en ATP-geïnduceerde dood van PMA-gedifferentieerde THP-1-macrofagen en de validatie ervan

Celdood is een fundamenteel proces in alle levende organismen. Het protocol stelt een door lipopolysaccharide (LPS) en adenosinetrifosfaat (ATP) geïnduceerde phorbol-12-myristaat-13-acetaat (PMA)-gedifferentieerde lipideafzetting in humaan monocyt (THP-1) macrofaagmodel vast om celdood te observeren. LPS in combinatie met ATP is een klassieke inflammatoire inductiemethode, die vaak wordt gebruikt om pyroptose te bestuderen, maar apoptose en necroptose reageren ook op stimulatie door LPS/ATP. Onder normale omstandigheden is fosfatidylserine alleen gelokaliseerd in de binnenste blaadje van het plasmamembraan. In de vroege stadia van pyroptose, apoptose en necroptose blijft het celmembraan echter intact en wordt het blootgesteld aan fosfatidylserine, en in de latere stadia verliest het celmembraan zijn integriteit. Hier werd flowcytometrie gebruikt om de dubbele kleuring van Annexine V en 7-aminoactinomycine D (AAD) te analyseren om de celdood van de hele cellen te detecteren. De resultaten laten zien dat substantiële cellen stierven na stimulatie met LPS/ATP. Met behulp van scanning-elektronenmicroscopie observeren we de mogelijke vormen van celdood in individuele cellen. De resultaten geven aan dat cellen pyroptose, apoptose of necroptose kunnen ondergaan na stimulatie met LPS/ATP. Dit protocol richt zich op het observeren van de dood van macrofagen na stimulatie met LPS/ATP. De resultaten toonden aan dat celdood na LPS- en ATP-stimulatie niet beperkt is tot pyroptose en dat apoptose en necrotische apoptose ook kunnen voorkomen, waardoor onderzoekers celdood na LPS- en ATP-stimulatie beter kunnen begrijpen en een betere experimentele methode kunnen kiezen.