LPS og ATP-indusert død av PMA-differensierte THP-1-makrofager og dens validering

Celledød er en grunnleggende prosess i alle levende organismer. Protokollen etablerer et lipopolysakkarid (LPS) og adenosintrifosfat (ATP)-indusert phorbol-12-myristat-13-acetat (PMA)-differensiert lipidavsetning i human monocytt (THP-1) makrofagmodell for å observere celledød. LPS kombinert med ATP er en klassisk inflammatorisk induksjonsmetode, ofte brukt til å studere pyroptose, men apoptose og nekrotose reagerer også på stimulering av LPS/ATP. Under normale omstendigheter er fosfatidylserin bare lokalisert i den indre brosjyren til plasmamembranen. Imidlertid, i de tidlige stadiene av pyroptose, apoptose og nekrotose, forblir cellemembranen intakt og utsatt for fosfatidylserin, og i de senere stadiene mister cellemembranen sin integritet. Her ble flowcytometri brukt til å analysere Annexin V og 7-Aminoactinomycin D (AAD) dobbeltfarging for å oppdage celledøden fra hele cellene. Resultatene viser at betydelige celler døde etter stimulering med LPS/ATP. Ved hjelp av skanningselektronmikroskopi observerer vi mulige former for celledød i enkeltceller. Resultatene indikerer at celler kan gjennomgå pyroptose, apoptose eller nekrotose etter stimulering med LPS/ATP. Denne protokollen fokuserer på å observere døden av makrofager etter stimulering med LPS/ATP. Resultatene viste at celledød etter LPS- og ATP-stimulering ikke er begrenset til pyroptose og at apoptose og nekrotisk apoptose også kan forekomme, noe som hjelper forskere bedre å forstå celledød etter LPS- og ATP-stimulering og velge en bedre eksperimentell metode.