LPS och ATP-inducerad död av PMA-differentierade THP-1-makrofager och dess validering

Celldöd är en grundläggande process i alla levande organismer. Protokollet etablerar en lipopolysackarid (LPS) och adenosintrifosfat (ATP)-inducerad forbol-12-myristat-13-acetat (PMA)-differentierad lipiddeposition i human monocyt (THP-1) makrofagmodell för att observera celldöd. LPS i kombination med ATP är en klassisk inflammatorisk induktionsmetod, som ofta används för att studera pyroptos, men apoptos och nekrotos svarar också på stimulering av LPS/ATP. Under normala omständigheter är fosfatidylserin endast lokaliserat i det inre bladet av plasmamembranet. Men i de tidiga stadierna av pyroptos, apoptos och nekrotos förblir cellmembranet intakt och exponerat för fosfatidylserin, och i de senare stadierna förlorar cellmembranet sin integritet. Här användes flödescytometri för att analysera Annexin V och 7-Aminoactinomycin D (AAD) dubbelfärgning för att detektera celldöd från hela cellerna. Resultaten visar att betydande celler dog efter stimulering med LPS/ATP. Med hjälp av svepelektronmikroskopi observerar vi möjliga former av celldöd i enskilda celler. Resultaten tyder på att celler kan genomgå pyroptos, apoptos eller nekrotos efter stimulering med LPS/ATP. Detta protokoll fokuserar på att observera döden av makrofager efter stimulering med LPS/ATP. Resultaten visade att celldöd efter LPS- och ATP-stimulering inte är begränsad till pyroptos och att apoptos och nekrotisk apoptos också kan förekomma, vilket hjälper forskare att bättre förstå celldöd efter LPS- och ATP-stimulering och välja en bättre experimentell metod.