Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

В этом исследовании представлена уникальная процедура тупого препарирования для сохранения целостности желе Уортона (WJ), что приводит к меньшему повреждению WJ и большему количеству и жизнеспособности собранных мезенхимальных стволовых клеток (МСК). Метод демонстрирует превосходный выход и пролиферативную способность по сравнению с обычными методами острого рассечения.

Abstract

Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) представляют собой популяцию мультипотентных клеток с замечательными регенеративными и иммуномодулирующими свойствами. Желе Уортона (WJ) из пуповины (ЯК) вызывает все больший интерес в биомедицинской области как выдающийся источник МСК. Тем не менее, возникли такие проблемы, как ограниченное предложение и отсутствие стандартизации в существующих методах. В данной статье представлен новый метод повышения выхода МСК путем отсечения неповрежденного МСК от пуповины. Метод использует тупое рассечение для удаления эпителиального слоя, сохраняя целостность всего МСК и приводя к увеличению количества и жизнеспособности собранных МСК. Такой подход значительно снижает отходы WJ по сравнению с обычными методами острого рассечения. Чтобы обеспечить чистоту WJ-MSC и свести к минимуму внешнее клеточное воздействие, была проведена процедура с использованием внутреннего натяжения для отслаивания эндотелия после переворачивания ЯК. Кроме того, чашка Петри была перевернута на короткое время во время культивирования эксплантов для улучшения прикрепления и роста клеток. Сравнительный анализ продемонстрировал превосходство предложенного метода, показав более высокий выход WJ и WJ-MSC с лучшей жизнеспособностью по сравнению с традиционными методами. Сходная морфология и характер экспрессии маркеров клеточной поверхности в обоих методах подтверждают их характерность и чистоту для различных применений. Этот метод обеспечивает высокопродуктивный и высокожизнеспособный подход к выделению WJ-MSC, демонстрируя большой потенциал для клинического применения МСК.

Introduction

С момента первого выделения мезенхимальных стволовых клеток (МСК) из желе Уортона (WJ) в 1991 году, эти мультипотентные стволовые клетки привлекли значительное внимание исследователей благодаря своим регенеративным свойствами способности к многолинейной дифференцировке. МСК могут быть выделены из различных источников, включая костный мозг, периферическую кровь, пульпу зубов, жировую ткань, ткани плода (аборт человека) и ткани, связанные с рождением2. Пуповина (ЯК) стала многообещающим резервуаром благодаря своей неинвазивной природе, обильному выходу клеток и способности к дифференцировке, демонстрируя высокую скорость п....

Protocol

Образцы были получены от здоровых доноров из Шэньчжэньской районной больницы матери и ребенка Лунган, провинция Гуандун, Китай. Использование человеческих образцов для исследования было одобрено Комитетом по этике больницы Шэньчжэня Пекинского университета китайской медицины (SZLDH2020.......

Representative Results

Процедуры сбора и культивирования UC-MSC, а также их последующий анализ обобщены на рисунке 1. UC был аккуратно разделен на несколько секций с помощью уникального метода; конкретная схема работы основных процедур проиллюстрирована на рисунке 2. Рост клеток и.......

Discussion

МСК представляют собой динамичную область исследований с глубокими последствиями для регенеративной медицины22. Их уникальные свойства делают их центром научных исследований и обладают потенциалом для революции в лечении широкого спектра заболеваний и травм7

Acknowledgements

Работа выполнена при финансовой поддержке Национального фонда естественных наук Китая (82172107), Фонда естественных наук провинции Гуандун, Китай (2021A1515011927, 2021A1515010918, 2020A1515110347), Шэньчжэньского фонда медицинских исследований (SMRF. D2301015), Шэньчжэньский муниципальный комитет по науке и технологическим инновациям (JCYJ20210324135014040, JCYJ20220530172807016, JCYJ20230807150908018, JCYJ20230807150915031) и Специальный фонд экономического и технологического развития района Лунган (LGKCYLWS2022007).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
APC anti-human CD44 Antibody Biolegend 338806
24-well cell culture platesThermo Scientific142475
APC anti-human CD73 (Ecto-5'-nucleotidase) Antibody Biolegend 344006
APC Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) AntibodyBiolegend 400122
AutoclaveHIRAYAMAHVE-50
Automatic Cell CounterCountstarFL-CD
BAMBANKER Cryopreservation SolutionWako302-14681
Cell Staining BufferBiolegend 420201
Centrifugal MachineEppendorf5424R
Clean BenchShanghai ZhiChengC1112B
CO2 IncubatorThermo ScientificHERAcell 150i
D-PBSSolarbioD1040
Electro- thermostatic Blast OvenShanghai JingHongDHG-9423A
FITC anti-human CD105 Antibody Biolegend 323204
FITC anti-human CD90 (Thy1) Antibody Biolegend 328108
FITC Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) AntibodyBiolegend 400110
Flow CytometryBeckmanCytoFLEX
hemocytometerSuperior Marienfeld640410
Intracellular Staining Permeabilization Wash Buffer (10×) Biolegend 421002
Inverted Biological MicroscopeZEISSAxio Vert. A1
Liquid Nitrogen Storage TankThermo ScientificCY50935-70
Normal saline (NS)MeilunbioMA0083
PBSSolarbioP1032
PE anti-human CD11b AntibodyBiolegend 393112
PE anti-human CD19 Antibody Biolegend 392506
PE anti-human CD34 AntibodyBiolegend 343606
PE anti-human CD45 AntibodyBiolegend 368510
PE anti-human HLA-DR Antibody Biolegend 307606
PE Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) AntibodyBiolegend 400114
PE Mouse IgG2a, κ Isotype Ctrl (FC) AntibodyBiolegend 400214
Precision Electronic BalanceSatoriusPRACTUM313-1CN
Snowflake Ice MachineZIEGRAZBE 30-10
steriled 50 mL plastic tubeGreniner227270
Thermostatic Water BathShanghai YiHengHWS12
Trypsin 1:250SolarbioT8150
UltraGRO-AdvancedHelios HPCFDCGL50
Ultrapure and Pure Water Purification SystemMilli-QMilli-Q Reference
Xeno-Free Human MSC Culture MediumFUKOKU T2011301

References

  1. Abbaszadeh, H., et al. Regenerative potential of Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells: A new horizon of stem cell therapy. J Cell Physiol. 235 (12), 9230-9240 (2020).
  2. Liau, L. L., Ruszymah, B. H. I., Ng, M. H., Law, J. X.

Explore More Articles

209

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved