A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
В этом исследовании представлена уникальная процедура тупого препарирования для сохранения целостности желе Уортона (WJ), что приводит к меньшему повреждению WJ и большему количеству и жизнеспособности собранных мезенхимальных стволовых клеток (МСК). Метод демонстрирует превосходный выход и пролиферативную способность по сравнению с обычными методами острого рассечения.
Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) представляют собой популяцию мультипотентных клеток с замечательными регенеративными и иммуномодулирующими свойствами. Желе Уортона (WJ) из пуповины (ЯК) вызывает все больший интерес в биомедицинской области как выдающийся источник МСК. Тем не менее, возникли такие проблемы, как ограниченное предложение и отсутствие стандартизации в существующих методах. В данной статье представлен новый метод повышения выхода МСК путем отсечения неповрежденного МСК от пуповины. Метод использует тупое рассечение для удаления эпителиального слоя, сохраняя целостность всего МСК и приводя к увеличению количества и жизнеспособности собранных МСК. Такой подход значительно снижает отходы WJ по сравнению с обычными методами острого рассечения. Чтобы обеспечить чистоту WJ-MSC и свести к минимуму внешнее клеточное воздействие, была проведена процедура с использованием внутреннего натяжения для отслаивания эндотелия после переворачивания ЯК. Кроме того, чашка Петри была перевернута на короткое время во время культивирования эксплантов для улучшения прикрепления и роста клеток. Сравнительный анализ продемонстрировал превосходство предложенного метода, показав более высокий выход WJ и WJ-MSC с лучшей жизнеспособностью по сравнению с традиционными методами. Сходная морфология и характер экспрессии маркеров клеточной поверхности в обоих методах подтверждают их характерность и чистоту для различных применений. Этот метод обеспечивает высокопродуктивный и высокожизнеспособный подход к выделению WJ-MSC, демонстрируя большой потенциал для клинического применения МСК.
С момента первого выделения мезенхимальных стволовых клеток (МСК) из желе Уортона (WJ) в 1991 году, эти мультипотентные стволовые клетки привлекли значительное внимание исследователей благодаря своим регенеративным свойствами способности к многолинейной дифференцировке. МСК могут быть выделены из различных источников, включая костный мозг, периферическую кровь, пульпу зубов, жировую ткань, ткани плода (аборт человека) и ткани, связанные с рождением2. Пуповина (ЯК) стала многообещающим резервуаром благодаря своей неинвазивной природе, обильному выходу клеток и способности к дифференцировке, демонстрируя высокую скорость п....
Образцы были получены от здоровых доноров из Шэньчжэньской районной больницы матери и ребенка Лунган, провинция Гуандун, Китай. Использование человеческих образцов для исследования было одобрено Комитетом по этике больницы Шэньчжэня Пекинского университета китайской медицины (SZLDH2020.......
Процедуры сбора и культивирования UC-MSC, а также их последующий анализ обобщены на рисунке 1. UC был аккуратно разделен на несколько секций с помощью уникального метода; конкретная схема работы основных процедур проиллюстрирована на рисунке 2. Рост клеток и.......
МСК представляют собой динамичную область исследований с глубокими последствиями для регенеративной медицины22. Их уникальные свойства делают их центром научных исследований и обладают потенциалом для революции в лечении широкого спектра заболеваний и травм7
Авторы не сообщают о конфликте интересов.
Работа выполнена при финансовой поддержке Национального фонда естественных наук Китая (82172107), Фонда естественных наук провинции Гуандун, Китай (2021A1515011927, 2021A1515010918, 2020A1515110347), Шэньчжэньского фонда медицинских исследований (SMRF. D2301015), Шэньчжэньский муниципальный комитет по науке и технологическим инновациям (JCYJ20210324135014040, JCYJ20220530172807016, JCYJ20230807150908018, JCYJ20230807150915031) и Специальный фонд экономического и технологического развития района Лунган (LGKCYLWS2022007).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
APC anti-human CD44 Antibody | Biolegend | 338806 | |
24-well cell culture plates | Thermo Scientific | 142475 | |
APC anti-human CD73 (Ecto-5'-nucleotidase) Antibody | Biolegend | 344006 | |
APC Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400122 | |
Autoclave | HIRAYAMA | HVE-50 | |
Automatic Cell Counter | Countstar | FL-CD | |
BAMBANKER Cryopreservation Solution | Wako | 302-14681 | |
Cell Staining Buffer | Biolegend | 420201 | |
Centrifugal Machine | Eppendorf | 5424R | |
Clean Bench | Shanghai ZhiCheng | C1112B | |
CO2 Incubator | Thermo Scientific | HERAcell 150i | |
D-PBS | Solarbio | D1040 | |
Electro- thermostatic Blast Oven | Shanghai JingHong | DHG-9423A | |
FITC anti-human CD105 Antibody | Biolegend | 323204 | |
FITC anti-human CD90 (Thy1) Antibody | Biolegend | 328108 | |
FITC Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400110 | |
Flow Cytometry | Beckman | CytoFLEX | |
hemocytometer | Superior Marienfeld | 640410 | |
Intracellular Staining Permeabilization Wash Buffer (10×) | Biolegend | 421002 | |
Inverted Biological Microscope | ZEISS | Axio Vert. A1 | |
Liquid Nitrogen Storage Tank | Thermo Scientific | CY50935-70 | |
Normal saline (NS) | Meilunbio | MA0083 | |
PBS | Solarbio | P1032 | |
PE anti-human CD11b Antibody | Biolegend | 393112 | |
PE anti-human CD19 Antibody | Biolegend | 392506 | |
PE anti-human CD34 Antibody | Biolegend | 343606 | |
PE anti-human CD45 Antibody | Biolegend | 368510 | |
PE anti-human HLA-DR Antibody | Biolegend | 307606 | |
PE Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400114 | |
PE Mouse IgG2a, κ Isotype Ctrl (FC) Antibody | Biolegend | 400214 | |
Precision Electronic Balance | Satorius | PRACTUM313-1CN | |
Snowflake Ice Machine | ZIEGRA | ZBE 30-10 | |
steriled 50 mL plastic tube | Greniner | 227270 | |
Thermostatic Water Bath | Shanghai YiHeng | HWS12 | |
Trypsin 1:250 | Solarbio | T8150 | |
UltraGRO-Advanced | Helios | HPCFDCGL50 | |
Ultrapure and Pure Water Purification System | Milli-Q | Milli-Q Reference | |
Xeno-Free Human MSC Culture Medium | FUKOKU | T2011301 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved