הקמת מודל השתלת עוברים במבחנה

Summary

פרוטוקול זה מתאר מתודולוגיות לביסוס מודל פשוט ויעיל להשתלת עוברים במבחנה להערכת המולקולות הרלוונטיות המשפיעות על תהליך השתלת העוברים.

Abstract

השתלת עובר היא הצעד הראשון בביסוס הריון מוצלח. מודל במבחנה להשתלת עוברים הוא קריטי למחקר ביולוגי בסיסי, פיתוח תרופות והקרנה. מאמר זה מציג מודל פשוט, מהיר ויעיל ביותר במבחנה להשתלת עוברים. בפרוטוקול זה, אנו מציגים תחילה רכישת בלסטוציסט עכבר והכנת תאי אדנוקרצינומה של רירית הרחם האנושית (אישיקאווה) להשתלה, ולאחר מכן את שיטת התרבית המשותפת עבור עוברי עכברים ותאי אישיקאווה. לבסוף, ערכנו מחקר כדי להעריך את ההשפעה של ריכוזים משתנים של 17-β-אסטרדיול (E₂) ופרוגסטרון (P4) על שיעורי הידבקות עוברים בהתבסס על מודל זה. הממצאים שלנו גילו כי ריכוזים גבוהים של E₂ הפחיתו באופן משמעותי את הידבקות העובר, בעוד שתוספת של פרוגסטרון יכולה להחזיר את קצב ההידבקות. מודל זה מציע פלטפורמה פשוטה ומהירה להערכה וסינון של מולקולות המעורבות בתהליך ההדבקה, כגון ציטוקינים, תרופות וגורמי שעתוק השולטים בהשתלה ובקליטת רירית הרחם.

Introduction

השתלת עוברים, השלב הראשון של הריון מוצלח, חיונית להבנת הבסיס הביולוגי שלה ולהתמודדות עם אתגרי אי הפוריות. עם זאת, אילוצים אתיים מציבים מגבלות משמעותיות באיסוף דגימות עוברים קליניים אנושיים, ופוגעים במחקר על האינטראקציות המורכבות בין עוברים אנושיים לרירית הרחם במהלך תחילת ההריון¹. הבנה מעמיקה של מנגנונים מורכבים אלה חיונית לקידום מחקר ביולוגי בסיסי, גילוי תרופות ובריאות הרבייה.

מודלים קודמים במבחנה השתמשו במודלים של הידבקות שבהם תאי אפיתל רירית הרחם האנושיים (RL95-2)² היו בתרבית משותפת עם תחליפים עובריים, כגון BeWo, JAr, או Jeg-3³ choriocarcinoma cells. אף על פי כן, בחיר....

Protocol

טיפול בעכברים ומחקרים ניסיוניים בוצעו תחת פרוטוקולים שאושרו על ידי ועדת בעלי החיים של מכון שנגחאי לטכנולוגיות ביו-רפואיות ופרמצבטיות. הקפידו על נהלי בטיחות: לבשו תמיד ציוד מגן אישי (PPE) מתאים בעת טיפול בכימיקלים או בחומרים ביולוגיים.

1. רכישת עוברי עכבר

Discussion

הפשטות והמהירות של מודל המבחנה המוצע להשתלת עוברים מציעים יתרונות יוצאי דופן לבדיקות סקר תרופתיות בשלב מוקדם וליישומי מחקר אחרים. הפרוטוקול הפשוט, יחד עם אופי התפוקה הגבוהה של קווי תאי אישיקאווה, הופכים אותו למועמד אידיאלי למסכים בקנה מידה גדול, במיוחד בשלבים המוקדמים של גילוי תרופ?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development