Estabelecimento de um Modelo de Implantação Embrionária In Vitro

Summary

Este protocolo descreve metodologias para estabelecer um modelo simples e eficiente de implantação embrionária in vitro para avaliar as moléculas relevantes que afetam o processo de implantação embrionária.

Abstract

A implantação do embrião é o primeiro passo para o estabelecimento de uma gravidez bem-sucedida. Um modelo in vitro para implantação de embriões é fundamental para pesquisa biológica básica, desenvolvimento de medicamentos e triagem. Este trabalho apresenta um modelo in vitro simples, rápido e altamente eficiente para implantação embrionária. Neste protocolo, primeiro apresentamos a aquisição de blastocisto de camundongo e a preparação de células de adenocarcinoma endometrial humano (Ishikawa) para implantação, seguida pelo método de co-cultura para embriões de camundongo e células de Ishikawa. Finalmente, realizamos um estudo para avaliar o impacto de concentrações variáveis de 17-β-estradiol (E₂) e progesterona (P4) nas taxas de adesão embrionária com base neste modelo. Nossos achados revelaram que altas concentrações de E₂ reduziram significativamente a adesão embrionária, enquanto a adição de progesterona poderia restaurar a taxa de adesão. Este modelo oferece uma plataforma simples e rápida para avaliar e rastrear moléculas envolvidas no processo de adesão, como citocinas, drogas e fatores de transcrição que controlam a implantação e a receptividade endometrial.

Introduction

A implantação embrionária, etapa inicial do sucesso da gravidez, é crucial para entender sua base biológica e enfrentar os desafios da infertilidade. No entanto, as restrições éticas representam limitações significativas na coleta de amostras clínicas de embriões humanos, dificultando a pesquisa sobre as intrincadas interações entre embriões humanos e o endométrio durante o início da gravidez¹. Uma compreensão profunda desses mecanismos complexos é vital para o avanço da pesquisa biológica fundamental, descoberta de medicamentos e saúde reprodutiva.

Modelos in vitro anteriores empregaram modelos de adesão em que célu....

Protocol

O manuseio de camundongos e estudos experimentais foram realizados sob protocolos aprovados pelo Comitê Animal do Instituto de Tecnologias Biomédicas e Farmacêuticas de Xangai. Garanta os procedimentos de segurança: Sempre use equipamento de proteção individual (EPI) adequado ao manusear produtos químicos ou materiais biológicos.

1. Aquisição de embriões de camundongos

NOTA: Esta seção descreve o processo de obtenção de embriões de cam.......

Discussion

A simplicidade e rapidez do modelo in vitro proposto para implantação de embriões oferecem vantagens notáveis para a triagem de medicamentos em estágio inicial e outras aplicações de pesquisa. O protocolo simples, juntamente com a natureza de alto rendimento das linhagens celulares de Ishikawa, o torna um candidato ideal para telas em larga escala, particularmente nos estágios iniciais da descoberta de medicamentos. Liang¹³ descobriu que o knockdown de TAGLN2 diminuiu a capacidade.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
17-β-estradiol	SIGMA	3301	Most potent mammalian estrogenic hormone
BD Falcon	BD	353001	Bacteriological Petri Dishes 35 x 10 mm style w/tight lid, crystal-grade virgin polystyrene, sterile
Biosafety Cabinet	ESCO	class BSC	Aseptic operations, making culture dishes, aliquoting reagents, etc
CO2 Incubator	Thermo	8000DH	Embryo culture
Culture plate	Corning	3506	Cell culture
DMEM/F12	Gibco	1133032	DMEM/F12 (1x), liquid 1:1,Contains L-glutamine and 15 mM HEPES buffer
Fetal Bovine Serum	Gibco	10099141	Fetal Bovine Serum, Qualified, Australia Origin
Gelatin	SIGMA	G9391	Type B, powder, BioReagent, suitable for cell culture
HCG	Nanjing Aibei	M2520	Sterilization reagent, intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Hyaluronidase	SIGMA	V900833	Reagent grade, powder
KSOM	Merck	MR-020P-D	(1x), Powder, w/o Phenol Red, 5 x 10 mL
L-glutamine	Gibco	25030081	L-glutamine-200 mM (100x), liquid
M2	Merck	MR-015-D	EmbryoMax M2 Medium (1x), Liquid, with Phenol Red
Mineral oil	SIGMA	M8410	Mineral oil is suitable for use as a cover layer to control evaporation and cross-contamination in various molecular biology applications
Penicillin-Streptomycin, liquid	Gibco	15140122	10,000 Units penicillin (base) and 10,000 units streptomycin (base), utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline
PMSG	Nanjing Aibei	M2620	Sterilization reagent ,intraperitoneal injection, 50 IU/mL
Progesterone	SIGMA	5341	Steroid hormone secreted by the corpus luteum during the latter half of the menstrual cycle
Sodium pyruvate	Gibco	11360070	Sodium pyruvate is commonly added to cell culture media as a carbon source in addition to glucose
Stereomicroscope	Olympus	SZX7	Embryo retrieval and observation of embryo development