ELISAアッセイを用いた8-oxo-dGレベルの定量化によるMCF-7細胞の酸化的DNA損傷の評価

8-オキソ-7,8-ジヒドロ-2'-デオキシグアノシン(8-オキソ-dG)塩基は、一般的に観察されるDNA酸化的損傷の主な形態です。DNA障害は遺伝子発現に深く影響し、神経変性疾患、がん、老化を刺激する極めて重要な因子として機能します。したがって、8-oxoGの正確な定量は、DNA損傷検出法の研究において臨床的に重要です。しかし、現在のところ、8-oxoG検出の既存のアプローチは、利便性、便宜性、手頃な価格、および感度の向上の点で課題を提起しています。私たちは、非常に効率的で迅速な比色法であるサンドイッチ酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)技術を使用して、さまざまな濃度の過酸化水素(H₂O₂)で刺激されたMCF-7細胞サンプルの8-oxo-dG含有量の変動を検出しました。我々は、MCF-7細胞におけるH 2 O 2の酸化的損傷を誘発するH₂O₂ のIC₅₀ 値を検出することにより、MCF-7細胞の濃度を決定した。続いて、MCF-7細胞を0、0.25、および0.75 mM H₂O₂ で12時間処理し、細胞から8-oxo-dGを抽出しました。最後に、サンプルをELISAにかけました。プレートの拡散、洗浄、インキュベーション、発色、反応の終了、データ収集などの一連のステップを経て、H₂O₂によって誘導されたMCF-7細胞の8-oxo-dG含量の変化を検出することに成功しました。このような取り組みを通じて、細胞試料中のDNA酸化損傷の程度を評価する方法を確立し、より簡便でDNA損傷検出の手法の開発を進めることを目指します。この取り組みは、DNA酸化損傷と疾患に関する臨床研究や有害物質の検出など、さまざまな領域との間の関連解析の探求に有意義な貢献をする準備ができています。