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L'epitelio pigmentato retinico (RPE) agisce come una barriera cruciale tra la coroide e la retina, promuovendo la salute e la funzione dei tipi di cellule retiniche, come i fotorecettori. In questo articolo, descriviamo un protocollo semplice ed efficace per isolare e coltivare l'EPR murino adulto.
Le cellule epiteliali pigmentate retiniche (RPE) sono fondamentali per il corretto funzionamento della retina. La disfunzione dell'RPE è coinvolta nella patogenesi di importanti malattie della retina, come la degenerazione maculare legata all'età, la retinite pigmentosa e la retinopatia diabetica. Presentiamo un approccio semplificato per l'isolamento dell'RPE dagli occhi adulti murina. A differenza dei metodi precedentemente riportati, questo approccio consente l'isolamento e la coltura di RPE altamente puro da topi adulti. Questo metodo semplice e veloce non richiede grandi competenze tecniche ed è realizzabile con strumenti scientifici e reagenti di base. Gli RPE primari sono isolati da topi di fondo C57BL/6 di età compresa tra 3 e 14 settimane mediante enucleazione dell'occhio seguita dalla rimozione del segmento anteriore. La tripsinizzazione enzimatica e la centrifugazione vengono utilizzate per dissociare e isolare l'RPE dall'oculare. In conclusione, questo approccio offre un protocollo rapido ed efficace per l'utilizzo dell'RPE nello studio della funzione e della malattia retinica.
L'epitelio pigmentato retinico (RPE) è un monostrato cellulare specializzato che riveste la membrana di Bruch, situata tra i fotorecettori e la coroide1. Le cellule RPE svolgono un ruolo fondamentale nel corretto funzionamento della retina. Le cellule RPE trasportano il glucosio e la vitamina A ai fotorecettori, promuovono la visione mediante la reisomerizzazione di all-trans retinal in 11-cis retinal e mantengono i segmenti esterni del fotorecettore attraverso la fagocitosi dei segmenti esterni eliminati, rimuovono l'acqua dallo spazio sottoretinico, formano la barriera emato-retinica esterna attraverso la presenza di giunzioni strette e secer....
L'uso di soggetti animali in questo studio è stato approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) della Case Western Reserve University.
1. Preparazione dei reagenti
Il protocollo descritto è stato utilizzato su topi di fondo C57BL/6. Il genere non sembra cambiare la capacità di coltivare l'EPR. I topi con meno di 6 settimane producono fogli di RPE limitati rispetto ai topi più anziani e potrebbero essere necessari più occhi per raggiungere la confluenza ottimale. Dopo l'isolamento, le cellule RPE impiegano circa 3 giorni per stabilizzarsi e attaccarsi alla piastra di coltura cellulare. Circa 24 ore dopo l'isolamento, le cellule rotonde e pigmentate che sembrano anucleate hanno i.......
In questo articolo, abbiamo delineato un protocollo semplificato per l'isolamento e la coltura dell'epitelio pigmentato retinico murino. Le cellule RPE isolate dagli occhi di topi adulti esprimevano un marcatore specifico per RPE, RPE65, e un marcatore di giunzione intercellulare, ZO-1. Inoltre, le cellule coltivate si sono sviluppate in fogli esagonali pigmentati in coltura.
Diversi metodi per l'isolamento dell'RPE nei roditori sono stati pubblicati in precedenza<.......
Non ci sono informazioni finanziarie o non finanziarie rilevanti.
La ricerca riportata in questa pubblicazione è stata supportata da NIH Grants R01EY018341 and R01EY019250 (CSS), NIH Grant F31EY035156 (AH) e P30 EY011373. L'organizzazione finanziatrice non ha avuto alcun ruolo nella progettazione o nella conduzione di questa ricerca.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.009 RD Single-Edge Blades | Personna | 941202 | |
Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) | Corning | 10-013-CV | with 4.5 g/L glucose, L-glutamine, sodium pyruvate |
Fetal bovine serum | Corning | 35010CV | |
GlutaMAX, 100x | Gibco | 35050061 | |
Hank's Balanced Salt Solution | Gibco | 14175095 | no Calcium, no magnesium, no phenol red |
HEPES Buffer Solution (1M) | Gibco | 15630106 | |
MEM Non-Essential Amino Acids, 100x | Gibco | 11140050 | |
Micro-Unitome Knife | BVI Beaver | 377546 | |
Penicillin-Streptomycin Solution, 100x | Corning | 30-002-CI | |
Polystyrene Microplates | Falcon | 08-772-1 | 24-well or 48-well |
Regular Fetal Bovine Serum | Corning | 35-010-CV | |
Trypsin-EDTA (0.25%) | Gibco | 25200056 | with phenol red |
Vannas scissors | Fine Science Tools | 10091-12 |
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