Konsekvent levering af adeno-associeret virus via lateral hale-vene-injektion hos voksne mus

Mange lidelser påvirker flere organer eller involverer forskellige regioner i kroppen, så det er afgørende at levere terapier systemisk for at målrette mod de berørte celler placeret på forskellige steder. Intravenøs injektion er en meget anvendt systemisk leveringsvej i prækliniske undersøgelser, der vurderer behandlinger beregnet til administration i hele kroppen. Hos voksne mus involverer det intravenøs administration af det terapeutiske middel i musens laterale haleårer. Når de mestres, er hale-vene-injektioner sikre og hurtige og kræver kun enkle og almindeligt tilgængelige værktøjer. Hale-vene-injektioner er dog teknisk udfordrende og kræver omfattende træning og kontinuerlig øvelse for at sikre nøjagtig levering af den tilsigtede dosis.

Her beskriver vi en detaljeret, optimeret, lateral hale-vene-injektionsprotokol, som vi har udviklet baseret på vores erfaring og på anbefalinger, der tidligere var blevet rapporteret af andre grupper. Bortset fra musespændere og insulinsprøjter kræver denne protokol kun reagenser og udstyr, der er let tilgængeligt i de fleste laboratorier. Vi fandt ud af, at overholdelse af denne protokol resulterer i konsekvent vellykket intravenøs levering af adeno-associeret virus (AAV) i halevenerne hos usetede 7-9 uger gamle mus. Derudover beskriver vi de optimerede protokoller til histologisk påvisning af fluorescerende reporterproteiner og vektorgenom pr. diploid genom (vg/dg) kvantificering, der bruges til at vurdere AAV-transduktion og biodistribution. Målet med denne protokol er at hjælpe eksperimenter med nemt at udføre hale-vene-injektioner med succes og konsekvent, hvilket kan reducere den øvelsestid, der er nødvendig for at mestre teknikken.