Identificazione di rare cellule T antigene-specifiche da polmoni di topo con tetrameri del complesso peptide:istocompatibilità maggiore

L'identificazione e la caratterizzazione delle cellule T antigene-specifiche durante la salute e la malattia rimane una chiave per migliorare la nostra comprensione della fisiopatologia immunitaria. Le sfide tecniche legate al tracciamento delle popolazioni di cellule T antigene-specifiche all'interno del repertorio endogeno delle cellule T sono state notevolmente avanzate dallo sviluppo dei reagenti tetrameri peptide:MHC. Questi multimeri solubili marcati in fluorescenza di molecole MHC di classe I o II complessate con epitopi di peptidi antigenici si legano direttamente alle cellule T con corrispondente specificità del recettore delle cellule T (TCR) e possono, quindi, identificare popolazioni di cellule T antigene-specifiche nel loro stato nativo senza la necessità di una risposta funzionale indotta da ex vivo stimolazione. Per popolazioni estremamente rare, le cellule T legate ai tetrameri possono essere arricchite magneticamente per aumentare la sensibilità e l'affidabilità del rilevamento.

Con l'approfondimento dello studio dell'immunità delle cellule T residenti nei tessuti, vi è un urgente bisogno di identificare le cellule T antigene-specifiche che viaggiano e risiedono nei tessuti non linfoidi. In questo protocollo, presentiamo una serie dettagliata di istruzioni per l'isolamento e la caratterizzazione delle cellule T antigene-specifiche presenti all'interno dei polmoni di topo. Ciò comporta l'isolamento delle cellule T dal tessuto polmonare digerito, seguito da una fase generale di arricchimento magnetico delle cellule T e dalla colorazione con tetramero per l'analisi e lo smistamento della citometria a flusso. Le fasi evidenziate in questo protocollo utilizzano tecniche comuni e reagenti prontamente disponibili, rendendolo accessibile a quasi tutti i ricercatori impegnati nell'immunologia delle cellule T di topo, e sono altamente adattabili per una varietà di analisi a valle di qualsiasi popolazione di cellule T antigene-specifiche a bassa frequenza che risiedono nei polmoni.