Optimeret protokol til tarm schweiziske ruller og immunfluorescerende farvning af paraffinindlejret væv

Tarmen er et komplekst organ, der består af tyndtarmen og tyktarmen. Tyndtarmen kan yderligere opdeles i tolvfingertarmen, jejunum og ileum. Hver anatomisk region i tarmen har en unik funktion, der afspejles af forskelle i cellulær struktur. Undersøgelse af ændringer i tarmen kræver en dybdegående analyse af forskellige vævsregioner og cellulære ændringer. For at studere tarmen og visualisere store stykker væv bruger forskere almindeligvis en teknik kendt som tarm schweiziske ruller. I denne teknik er tarmen opdelt i hver anatomisk region og fastgjort i en flad retning. Derefter rulles vævet omhyggeligt og behandles til paraffinindlejring. Korrekt vævsfiksering og orientering er en ofte overset laboratorieteknik, men er kritisk vigtig for downstream-analyse. Derudover kan forkert schweizisk rulning af tarmvæv beskadige det skrøbelige tarmepitel, hvilket fører til dårlig vævskvalitet til immunfarvning. At sikre velfikseret og korrekt orienteret væv med intakte cellulære strukturer er et afgørende skridt, der sikrer optimal visualisering af tarmceller. Vi præsenterer en omkostningseffektiv og enkel metode til fremstilling af schweiziske ruller til at inkludere alle sektioner af tarmen i en enkelt paraffinindlejret blok. Vi beskriver også optimeret immunfluorescensfarvning af tarmvæv for at studere forskellige aspekter af tarmepitelet. Følgende protokol giver forskere en omfattende guide til at opnå immunfluorescensbilleder af høj kvalitet gennem tarmvævsfiksering, schweizisk rulleteknik og immunfarvning. Anvendelse af disse raffinerede tilgange bevarer tarmepitelets indviklede morfologi og fremmer en dybere forståelse af tarmfysiologi og patobiologi.