Protocolo otimizado para rolos suíços intestinais e coloração imunofluorescente de tecido embebido em parafina

O intestino é um órgão complexo composto pelos intestinos delgado e grosso. O intestino delgado pode ser dividido em duodeno, jejuno e íleo. Cada região anatômica do intestino tem uma função única que se reflete nas diferenças na estrutura celular. Investigar alterações no intestino requer uma análise aprofundada de diferentes regiões teciduais e alterações celulares. Para estudar o intestino e visualizar grandes pedaços de tecido, os pesquisadores costumam usar uma técnica conhecida como rolos suíços intestinais. Nesta técnica, o intestino é dividido em cada região anatômica e fixado em uma orientação plana. Em seguida, o tecido é cuidadosamente enrolado e processado para inclusão em parafina. A fixação e orientação adequadas do tecido são uma técnica laboratorial frequentemente negligenciada, mas são extremamente importantes para a análise a jusante. Além disso, o enrolamento inadequado do tecido intestinal pode danificar o epitélio intestinal frágil, levando à má qualidade do tecido para imunocoloração. Garantir um tecido bem fixado e devidamente orientado com estruturas celulares intactas é uma etapa crucial que garante a visualização ideal das células intestinais. Apresentamos um método simples e econômico para fazer rolos suíços para incluir todas as seções do intestino em um único bloco embebido em parafina. Também descrevemos a coloração otimizada por imunofluorescência do tecido intestinal para estudar vários aspectos do epitélio intestinal. O protocolo a seguir fornece aos pesquisadores um guia abrangente para obter imagens de imunofluorescência de alta qualidade por meio de fixação de tecido intestinal, técnica de rolo suíço e imunocoloração. O emprego dessas abordagens refinadas preserva a intrincada morfologia do epitélio intestinal e promove uma compreensão mais profunda da fisiologia intestinal e da patobiologia.