Optimerat protokoll för intestinala schweiziska rullar och immunofluorescensfärgning av paraffininbäddad vävnad

Tarmen är ett komplext organ som består av tunntarmen och tjocktarmen. Tunntarmen kan vidare delas in i tolvfingertarmen, jejunum och ileum. Varje anatomisk region i tarmen har en unik funktion som återspeglas av skillnader i cellulär struktur. För att undersöka förändringar i tarmen krävs en djupgående analys av olika vävnadsregioner och cellulära förändringar. För att studera tarmen och visualisera stora vävnadsbitar använder forskare ofta en teknik som kallas intestinal Swiss rolls. I denna teknik delas tarmen in i varje anatomisk region och fixeras i en platt orientering. Därefter rullas vävnaden försiktigt och bearbetas för paraffininbäddning. Korrekt vävnadsfixering och orientering är en ofta förbisedd laboratorieteknik men är kritiskt viktig för nedströmsanalys. Dessutom kan felaktig schweizisk rullning av tarmvävnad skada det ömtåliga tarmepitelet, vilket leder till dålig vävnadskvalitet för immunfärgning. Att säkerställa väl fixerad och korrekt orienterad vävnad med intakta cellulära strukturer är ett avgörande steg som säkerställer optimal visualisering av tarmceller. Vi presenterar en kostnadseffektiv och enkel metod för att göra rullarna så att de inkluderar alla delar av tarmen i ett enda paraffininbäddat block. Vi beskriver också optimerad immunofluorescensfärgning av tarmvävnad för att studera olika aspekter av tarmepitelet. Följande protokoll ger forskare en omfattande guide för att erhålla högkvalitativa immunofluorescensbilder genom fixering av tarmvävnad, schweizisk rullningsteknik och immunfärgning. Genom att använda dessa raffinerade tillvägagångssätt bevaras den intrikata morfologin hos tarmepitelet och främjar en djupare förståelse för tarmfysiologi och patobiologi.