अत्यधिक विभेदित और ध्रुवीकृत रेटिना वर्णक उपकला संस्कृतियों में ऑक्सीजन की खपत दर की दीर्घकालिक निगरानी

माइटोकॉन्ड्रियल चयापचय रेटिना वर्णक उपकला (आरपीई) के सामान्य कार्य के लिए महत्वपूर्ण है, फोटोरिसेप्टर अस्तित्व के लिए महत्वपूर्ण रेटिना में कोशिकाओं का एक मोनोलेयर। आरपीई माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (एएमडी) की एक बानगी है, जो विकसित दुनिया में अपरिवर्तनीय अंधापन का प्रमुख कारण है, और प्रोलिफेरेटिव विटेरेटिनोपैथी (पीवीआर), रेटिना टुकड़ी की एक अंधा जटिलता है। आरपीई अपक्षयी स्थितियों को आरपीई संस्कृति प्रणालियों द्वारा अच्छी तरह से तैयार किया गया है जो विवो आरपीई में नकल करने के लिए अत्यधिक विभेदित और ध्रुवीकृत हैं। हालांकि, ऑक्सीजन खपत दर (ओसीआर) की निगरानी, माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन के लिए एक प्रॉक्सी, ऐसी संस्कृति प्रणालियों में मुश्किल रही है क्योंकि आदर्श आरपीई ध्रुवीकरण और भेदभाव को बढ़ावा देने वाली स्थितियां आसान ओसीआर माप की अनुमति नहीं देती हैं।

यहां, हम एक मानक सेल कल्चर इनक्यूबेटर में इष्टतम विकास सब्सट्रेट और फिजियोलॉजिकल कल्चर मीडिया पर आरपीई को बनाए रखते हुए अच्छी तरह से विभेदित आरपीई संस्कृतियों में एक समय में हफ्तों के लिए ओसीआर की निगरानी करने के लिए एक उपन्यास प्रणाली, रेसिफर पेश करते हैं। यह प्रणाली कोशिकाओं के ऊपर मीडिया में मौजूद ऑक्सीजन एकाग्रता ढाल को मापकर ओसीआर की गणना करती है। हम ओसीआर का पता लगाने के लिए अन्य तरीकों पर इस प्रणाली के फायदों पर चर्चा करते हैं और आरपीई संस्कृतियों में ओसीआर को मापने के लिए सिस्टम कैसे स्थापित करें। हम सिस्टम का उपयोग करने के लिए मुख्य युक्तियों और तरकीबों, डेटा की व्याख्या करने के बारे में सावधानी, और अप्रत्याशित परिणामों के निवारण के लिए दिशानिर्देशों को कवर करते हैं।

हम सिस्टम द्वारा पता लगाए गए कोशिकाओं के ऊपर मीडिया में ऑक्सीजन ढाल के आधार पर हाइपोक्सिया, नॉर्मोक्सिया, या हाइपरॉक्सिया आरपीई संस्कृतियों के अनुभव के स्तर को एक्सट्रपलेशन करने के लिए एक ऑनलाइन कैलकुलेटर भी प्रदान करते हैं। अंत में, हम सिस्टम के दो अनुप्रयोगों की समीक्षा करते हैं, एक पीवीआर मॉडल में आरपीई कोशिकाओं की चयापचय स्थिति को मापते हैं और समझते हैं कि आरपीई चयापचय रूप से हाइपोक्सिया के लिए कैसे अनुकूल है। हम आशा करते हैं कि अत्यधिक ध्रुवीकृत और विभेदित आरपीई संस्कृतियों पर इस प्रणाली का उपयोग शारीरिक और रोग राज्यों दोनों के तहत आरपीई माइटोकॉन्ड्रियल चयापचय की हमारी समझ को बढ़ाएगा।