Identificatie van slapende cellen in een zebravis T-cel acute lymfoblastische leukemiemodel met behulp van celproliferatiekleuring

Cellulaire rust is een toestand van groeistilstand of vertraagde proliferatie die wordt beschreven in normale en kankerstamcellen (CSC's). Rust kan CSC's beschermen tegen antiproliferatieve chemotherapie. In T-cel acute lymfatische leukemie (T-ALL) patiënt-afgeleide xenograft (PDX) muismodellen worden slapende cellen geassocieerd met behandelingsresistentie en stamvorming. Kleurstoffen voor celproliferatie zijn populaire hulpmiddelen voor het volgen van celdeling. De fluorescerende kleurstof is covalent verankerd in aminegroepen op het membraan en de macromoleculen in de cel. Dit maakt het mogelijk om gelabelde cellen tot 10 delingen te volgen, die kunnen worden opgelost door flowcytometrie.

Uiteindelijk zullen cellen met de hoogste proliferatiesnelheden een lage kleurstofretentie hebben, omdat deze bij elke celdeling wordt verdund, terwijl slapende, langzamer delende cellen de hoogste retentie hebben. Het gebruik van kleurstoffen voor celproliferatie om slapende cellen te isoleren is geoptimaliseerd en beschreven in T-ALL muismodellen. Als aanvulling op de bestaande muismodellen biedt het rag2:Myc-afgeleide zebravis T-ALL-model een uitstekende locatie om zelfvernieuwing in T-ALL te ondervragen vanwege de hoge frequentie van leukemische stamcellen (LSC's) en het gemak van zebravissen voor grootschalige transplantatie-experimenten.

Hier beschrijven we de workflow voor het kleuren van zebravis T-ALL-cellen met een celproliferatiekleurstof, het optimaliseren van de concentratie van de kleurstof voor zebraviscellen, het passeren van succesvol gekleurde cellen in vivo en het verzamelen van cellen met verschillende niveaus van kleurstofretentie door levende celsortering van getransplanteerde dieren. Gezien de afwezigheid van gevestigde celoppervlaktemakers voor LSC's in T-ALL, biedt deze benadering een functioneel middel om slapende cellen in vivo te ondervragen. Voor representatieve resultaten beschrijven we de implantatie-efficiëntie en de LSC-frequentie van hoge en lage kleurstofbehoudende cellen. Deze methode kan helpen bij het onderzoeken van aanvullende eigenschappen van slapende cellen, waaronder geneesmiddelrespons, transcriptieprofielen en morfologie.