Identificación de células quiescentes en un modelo de leucemia linfoblástica aguda de células T de pez cebra mediante tinción de proliferación celular

La quiescencia celular es un estado de detención del crecimiento o proliferación lenta que se describe en las células madre normales y cancerosas (CSC). La quiescencia puede proteger a las CSC de los fármacos quimioterapéuticos antiproliferativos. En los modelos de ratón de xenoinjerto derivado de pacientes (PDX) de leucemia linfoblástica aguda de células T (LLA-T), las células quiescentes se relacionan con la resistencia al tratamiento y la madre. Los tintes para la proliferación celular son herramientas populares para el seguimiento de la división celular. El colorante fluorescente se ancla covalentemente en grupos amina en la membrana y macromoléculas dentro de la célula. Esto permite el seguimiento de las células marcadas hasta 10 divisiones, que pueden resolverse mediante citometría de flujo.

En última instancia, las células con las tasas de proliferación más altas tendrán una baja retención de colorante, ya que se diluirá con cada división celular, mientras que las células inactivas y de división más lenta tendrán la mayor retención. El uso de colorantes de proliferación celular para aislar células inactivas se ha optimizado y descrito en modelos de ratón con LLA-T. Complementario a los modelos de ratón existentes, el modelo de LLA-ALL de pez cebra derivado de rag2:Myc proporciona un excelente lugar para interrogar la autorrenovación en la LLA-T debido a la alta frecuencia de células madre leucémicas (LSC) y la conveniencia del pez cebra para experimentos de trasplante a gran escala.

Aquí, describimos el flujo de trabajo para la tinción de células T-ALL de pez cebra con un colorante de proliferación celular, optimizando la concentración del colorante para células de pez cebra, pasando células teñidas con éxito in vivo y la recolección de células con diferentes niveles de retención de colorante mediante la clasificación de células vivas de animales trasplantados. Dada la ausencia de creadores de superficie celular bien establecidos para las LSC en la LLA-T, este enfoque proporciona un medio funcional para interrogar a las células inactivas in vivo. Para obtener resultados representativos, describimos la eficiencia del injerto y la frecuencia de LSC de celdas de alta y baja retención de colorante. Este método puede ayudar a investigar propiedades adicionales de las células quiescentes, incluida la respuesta a los fármacos, los perfiles transcripcionales y la morfología.