Preparação de um modelo modificado para reperfusão de oclusão da artéria cerebral média

Summary

Este protocolo descreve o processo de preparação para a reperfusão da oclusão da artéria cerebral média através da artéria carótida comum.

Abstract

O modelo de reperfusão de oclusão da artéria cerebral média (MCAO/R) é crucial para a compreensão dos mecanismos patológicos do AVC e para o desenvolvimento de medicamentos. No entanto, entre os métodos de modelagem comumente usados, o método de Koizumi frequentemente enfrenta escrutínio devido à sua ligadura da artéria carótida comum (CCA) e sua incapacidade de alcançar reperfusão adequada. Da mesma forma, o método de Longa tem sido criticado por desconectar e ligar a artéria carótida externa (ECA). Este estudo tem como objetivo apresentar um método de preparo de modelo modificado que preserve a integridade da ECA, envolva a inserção de uma sutura de náilon monofilamentar através da CCA, reparando a incisão ligada da CCA e mantendo a reperfusão da CCA. A reperfusão do fluxo sanguíneo foi confirmada por meio de imagens de fluxo de manchas a laser. Métodos de avaliação como a escala de Longa, Modified Neurological Severity Score, coloração com cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) e marcação de imunofluorescência de neurônios demonstraram que essa abordagem poderia induzir danos estáveis ao nervo isquêmico. Este protocolo de modelo MCAO/R modificado é simples e estável, fornecendo orientação valiosa para os profissionais no campo da isquemia cerebral.

Introduction

De acordo com a Organização Mundial da Saúde, o AVC permaneceu como a segunda principal causa de morte em todo o mundo na última década, com alta taxa de incidência, alta mortalidade e alta taxa de incapacidade ^1,2. À medida que a população global envelhece, espera-se que a incidência de AVC aumente nos países em desenvolvimento, tornando-se potencialmente a principal causa de morte prematura e incapacidade em adultos. Além disso, há uma tendência de ocorrência de acidentes vasculares cerebrais em uma idade mais jovem³. A perda da força de trabalho após um AVC também sobrecarrega as fam....

Protocol

O protocolo experimental foi conduzido em conformidade com as diretrizes do Comitê de Uso e Uso de Animais de Laboratório e Cuidados Institucionais com Animais da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Chengdu (número de registro: 2019-DL-002). Todos os dados de pesquisa com animais foram documentados seguindo as diretrizes ARRIVE (Animal Research: Reporting In Vivo Experiments). Ratos machos da raça Sprague Dawley (SD) pesando 250 g ± 20 g e com idade entre 6 e 8 semanas foram utilizados para este.......

Discussion

O modelo de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) induzido por uma sutura de náilon monofilamentar é o método mais comum usado para a preparação de modelos MCAO. Essa abordagem é amplamente adotada em estudos pré-clínicos e ganhou reconhecimento de muitos profissionais devido à sua simplicidade, falta de necessidade de craniotomia, trauma cirúrgico mínimo e capacidade de obter reperfusão.

Existem duas técnicas cirúrgicas clássicas para o filamento intraluminal MCAO: o mét.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Animal anesthesia system	Rayward Life Technology Co., Ltd	R500IE
Animal temperature maintainer	Rayward Life Technology Co., Ltd	69020
Cy3 secondary antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB21303
DAP1 antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	G1012
DCX antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB13434
Goat serum	Beyotime Biotechnology Co., LTD	C0265
GraphPad Prism	GraphPad Software	GraphPad Prism 8.0
ImageJ	National Institutes of Health	ImageJ software
Isofluran	Rayward Life Technology Co., Ltd	R510-22
Laser speckle blood flow imaging system	Rayward Life Technology Co., Ltd	PeriCam PSI NR
MAP-2 antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB11128
Miniature hand-held skull drill	Rayward Life Technology Co., Ltd	87001
monofilament suture	Rayward Life Technology Co., Ltd	250-280g
NeuN antibody	Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd	GB11138
OCT embedding agent	BIOSHARP	BL557A
Penicillin sodium	Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.	17121709-2
Quick Antigen Retrieval Solution for Frozen Sections	Beyotime Biotechnology Co., LTD	P0090
SD rats	SPF ( Beijing ) Biotechnology Co.,Ltd.	250-280g
Triton X-100	Beyotime Biotechnology Co., LTD	ST795
TTC	Chengdu Kelong Chemical Co., Ltd.	2019030101